猪抗蓝耳

发布时间：2021-11-23 14:27

　　猪病已成为当前制约养猪业健康发展的关键因素之一,其中猪蓝耳病和圆环病毒病为危害世界养猪生产的两大重要的疫病。PRRSV和PCV2都是能导致猪繁殖障碍的主要病原,此外,造成猪的免疫抑制,引起其他病原微生物的继发或并发感染,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失。猪的遗传学组成能够影响宿主对病毒的易感。研究表明,不同的猪种间对PRRSV和PCV2相关疾病的易感性存在差异是由于宿主遗传差异导致的。本研究首先对与PRRSV抗性相关的两个候选基因USP18和Mx1进行了启动子区功能分析,然后在实验条件下,研究遗传背景不同的莱芜猪和大长杂交商品猪对PCV2易感是否存在差异以及探讨抗性或易感差异的分子机制,寻找与猪抗PPRSV和PCV2有关的分子标记。主要的研究结果如下:1.本研究对比了中国地方猪种大蒲莲猪和杜-大-长杂交商品猪USP18基因启动子区活性,以及筛选了单核苷酸多态性对USP18转录的影响。我们发现大蒲莲猪的启动子活性明显高于杜-大-长杂交商品猪（P<0.05）;启动子删除试验中,当启动子从-1790删除到-1314时,其转录活性下降约60%（P<0.05）;同时MARC-145... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

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符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 猪蓝耳病的相关研究进展
        1.1.1 猪对PRRSV感染存在抗性差异
        1.1.2 USP18基因的研究现状
        1.1.3 Mx1基因的研究现状
    1.2 猪圆环病毒的研究进展
        1.2.1 猪圆环病毒基因组和分类
        1.2.2 猪圆环病毒的起源和演化
        1.2.3 猪圆环病毒的流行现状
        1.2.4 临床疾病
        1.2.5 PCV2发病机制
        1.2.6 在PCV2发病机制中细胞因子的作用
    1.3 RNA-seq技术
    1.4 SERPINA1基因的研究现状
    1.5 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物及攻毒
        2.1.2 样品采集
        2.1.3 毒株
        2.1.4 菌株及载体
        2.1.5 主要实验仪器和设备
        2.1.6 主要试剂和试剂盒及来源
        2.1.7 常用试剂的配制
        2.1.8 主要数据库和生物学软件
    2.2 实验方法
        2.2.1 猪基因组DNA的提取
        2.2.2 总RNA的提取及检测
        2.2.3 质粒DNA的提取（Tiangen试剂盒）
        2.2.4 凝胶回收PCR产物
        2.2.5 USP18和Mx1基因 5'调控区分析
        2.2.6 猪对PCV2感染的生物学反应
        2.2.7 RNA-seq分析肺组织差异表达基因
        2.2.8 统计分析
3 结果与分析
    3.1 USP18基因 5'调控区多态性分析
        3.1.1 大蒲莲猪和大长杂交商品猪启动子活性比较
        3.1.2 USP18基因启动子删除载体双荧光素酶活性分析
        3.1.3 USP18基因启动子区突变对PRRSV感染的影响
        3.1.4 不同品种中G–1533A位点的多态性分析
    3.2 Mx1基因 5'调控区多态分析
        3.2.1 Mx1基因 5'调控区扩增及载体构建
        3.2.2 Mx1基因启动子区删除载体荧光素酶活性比较
        3.2.3 PRRSV感染对Mx1基因不同载体启动子活性影响
        3.2.4 不同猪种中?547位点多态性的群体检测
    3.3 不同品种猪对PCV2感染的生物学反应
        3.3.1 莱芜猪和大长杂交商品猪对感染PCV2后的临床症状比较
        3.3.2 莱芜猪和大长杂交商品猪体温体重变化
        3.3.3 剖检病变
        3.3.4 PCV2感染 35d时莱芜猪和大长杂交商品猪肺脏和脾脏的病理变化
        3.3.5 PCV2感染对免疫球蛋白IgG的影响
        3.3.6 PCR测定莱芜猪和大长杂交商品猪血清中PCV2病毒的含量
        3.3.7 莱芜猪和大长杂交商品猪感染PCV2后血清中病毒拷贝数变化
        3.3.8 PCV2感染不同时期猪细胞因子蛋白水平表达的变化
    3.4 莱芜猪和大长杂交商品猪肺组织差异表达基因的筛选
        3.4.1 总RNA质量检测
        3.4.2 表达谱测序及生物信息学分析
        3.4.3 差异表达基因的筛选
        3.4.4 差异表达基因的GO功能注释结果
        3.4.5 差异基因KEGG分析
        3.4.6 差异表达基因的定量PCR检测
4 讨论
    4.1 与PRRSV抗性相关的两个基因启动子区多态性分析
        4.1.1 USP18基因启动子区多态性分析
        4.1.2 Mx1基因启动子区多态性分析
    4.2 莱芜猪和大长杂交商品猪对PCV2感染的临床症状
    4.3 PCV2感染后血清中细胞因子蛋白水平的动态变化
    4.4 差异表达基因的筛选与鉴定
5 结论
参考 文献
致谢
附录
博士期间发表论文和专利情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制[J]. 王鹏,郑兆鑫,刘明秋.  中国生物工程杂志. 2015(03)
[2]猪圆环病毒病的流行病学及防控知识[J]. 翁善钢.  中国畜牧业. 2014(05)
[3]猪圆环病毒2型、猪巨细胞病毒和TTV-2混合感染的流行病学调查[J]. 刘捷,陆琪,王先炜,李玉峰,王晓晔,姜平.  中国兽医学报. 2011(08)
[4]云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症（PRDC）患病猪群中PRRSV,PCV-2,CSFV,PRV混合感染调查[J]. 舒相华,尹革芬,杨志雷,宋春莲,李文贵,潘伟荣,刘旭川.  云南农业大学学报(自然科学版). 2011(01)
[5]四川省部分猪场PCV-2感染的血清学调查[J]. 吴俊,朱玲,易悦,石恬.  黑龙江畜牧兽医. 2010(17)
[6]猪圆环病毒2型的血清流行病学调查[J]. 李龙,张奎.  中国畜牧兽医. 2010(01)
[7]猪圆环病毒病的流行病学调查及其防治[J]. 王锡祯,王泽华.  中国动物保健. 2008(09)
[8]野猪和16个国内外猪种Mx1基因第14外显子多态性分析[J]. 吴圣龙,包文斌,鞠慧萍,丁浩,李碧春,朱国强,陈国宏.  畜牧兽医学报. 2008(03)
[9]表达猪2型圆环病毒ORF2基因的重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定[J]. 琚春梅,陈焕春,郗鑫,刘正飞,曹胜波.  中国农业科学. 2006(08)
[10]猪圆环病毒2型感染的血清学分析[J]. 周继勇,陈庆新,叶菊秀,朱家新,郑肖娟,商绍彬,陈亭飞,母安雄,周恩民.  中国兽医学报. 2004(01)

博士论文
[1]蒙古羊全基因组测序及基于转录组分析的抗寒性状遗传基础研究[D]. 侯成林.内蒙古农业大学 2014
[2]阉割影响猪脂肪沉积的分子机理研究[D]. 蔡兆伟.浙江大学 2011
[3]猪抗PRRSV相关基因的鉴定及功能分析[D]. 邢凤.山东农业大学 2011

硕士论文
[1]山东省猪圆环病毒病的血清学调查及PCV2分离株的遗传变异分析[D]. 徐妮.山东农业大学 2014
[2]基于高通量测序的辽宁绒山羊转录组研究与应用[D]. 刘红亮.西北农林科技大学 2013
[3]猪圆环病毒2型和细小病毒共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响[D]. 刘祥义.河北农业大学 2010



本文编号：3514071