雌性济宁青山羊生后性发育特性与雌孕激素及其受体关系的研究

发布时间：2021-11-23 19:36

　　济宁青山羊是我国一个优秀地方品种，具有性成熟早和繁殖率高的特点。从激素和受体表达水平等角度研究青山羊性发育过程，对于阐明济宁青山羊性成熟早的机理和培育新的高繁殖力山羊品种或品系等具有重要意义。本研究以雌性济宁青山羊为研究对象，应用放射免疫、组织化学、免疫组织化学、透射电镜、实时荧光定量PCR和WesternBlot等方法，从激素水平、细胞水平、亚细胞水平和分子水平等层面系统研究从出生到性成熟山羊血液中雌孕激素的波动、雌孕激素受体在下丘脑-垂体-卵巢轴以及雌孕激素受体在生殖器官发育过程中的增龄性分布特点及变化规律。研究结果显示，在雌性济宁青山羊生后发育阶段：①下丘脑与生殖有关的核团均有ER和PR阳性细胞分布，各核团ERα、ERβ和PR阳性细胞随日龄增长而数量增多，且同一日龄同一核团内ERβ阳性着色明显强于ERα（p<0.05）。PR免疫反应阳性神经元的分布和变化规律与ERβ基本一致。ERα、ERβ和PR阳性细胞在下丘脑中分布的增龄性变化与济宁青山羊性发育和性早熟的特点密切相关；②腺垂体嗜色细胞随着年龄增长而数量增多，体积增大；ERα主要分布于嗜色细胞的细胞核，ERβ和PR主要分布于... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
前言
    1.1 下丘脑-垂体-卵巢轴
    1.2 雌、孕激素及其受体的结构和功能
    1.3 性发育过程中外周血中雌、孕激素含量的变化
    1.4 雌、孕激素及其受体在下丘脑的研究
    1.5 雌、孕激素及其受体在腺垂体的研究
    1.6 雌、孕激素及其受体在卵巢的研究进展
    1.7 雌、孕激素及其受体在子宫的研究
    1.8 雌、孕激素及其受体在输卵管的研究
    1.9 济宁青山羊
    1.10 目的意义
    1.11 技术路线
材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物
        2.1.2 取材方法
        2.1.3 试验地点
        2.1.4 主要仪器设备及产地
        2.1.5 主要试验试剂及来源
        2.1.6 主要生物学数据库和生物学软件
    2.2 血清激素水平的测定
    2.3 细胞化学检测
        2.3.1 切片标本制备
        2.3.2 HE 染色
        2.3.3 PAS( Periodic acid - Schiff )染色
        2.3.4 甲苯胺蓝( Toluidine blue )染色
        2.3.5 瑞氏（Wright's staim）染色
        2.3.6 免疫组织化学 SABC 染色及图像分析
    2.4 透射电镜观察
    2.5 实时定量 RT-PCR
        2.5.1 总 RNA 的提取及质量鉴定
        2.5.2 引物设计及优化
        2.5.3 模板 DNA 的合成与 qRT-PCR
        2.5.4 qRT-PCR 标准曲线的制作及荧光定量数据分析
    2.6 免疫印迹与分析
        2.6.1 蛋白样品制备与蛋白含量检测
        2.6.2 SDS-PAGE 电泳
        2.6.3 转膜与免疫反应
        2.6.4 凝胶图象分析
    2.7 数据处理
结果
    3.1 济宁青山羊后发育阶段下丘脑中 ERα、ERβ和 PR 阳性细胞的增龄性变化
        3.1.1 血清中激素含量的测定结果
        3.1.2 下丘脑核团 HE 染色结果
        3.1.3 济宁青山羊下丘脑各核团 ERα和 ERβ免疫阳性细胞的发育性变化
        3.1.4 济宁青山羊下丘脑各核团 PR 免疫阳性细胞的发育性变化
    3.2 济宁青山羊生后发育阶段腺垂体细胞的增龄性变化以及雌、孕激素受体的分布与表达特点
        3.2.1 雌性济宁青山羊生后腺垂体的发育性变化
        3.2.2 雌性济宁青山羊腺垂体 ERα、ERβ和 PR 免疫阳性细胞的发育性变化
        3.2.3 青山羊腺垂体 Western blotting 结果及分析
    3.3 济宁青山羊生后卵巢发育特性与雌、孕激素受体的分布其 mRNA 的表达
        3.3.1 不同日龄卵巢的组织学观察
        3.3.2 总 RNA 及 qRT-PCR 产物的鉴定
        3.3.3 qRT-PCR 产物熔解曲线分析
        3.3.4 标准曲线及其目的基因的扩增效率
        3.3.5 卵巢内 ERα和 ERβ免疫阳性产物及其 mRNA 表达的发育性变化
        3.3.6 卵巢内 PR 免疫阳性产物及其 mRNA 表达的发育性变化
    3.4 济宁青山羊生后发育阶段子宫内 ERα、ERβ和 PR 的分布及其 mRNA 的表达
        3.4.1 ERα免疫阳性细胞在生后发育时期子宫内的分布及 mRNA 表达
        3.4.2 ERβ免疫阳性细胞在生后发育时期子宫内的分布及 mRNA 表达
        3.4.3 PR 免疫阳性细胞在生后发育时期子宫内的分布及 mRNA 表达
    3.5 济宁青山羊生后发育阶段输卵管壶腹部与伞部粘膜上皮的试验观察
        3.5.1 不同月龄输卵管粘膜上皮细胞的组织化学染色结果
        3.5.2 输卵管粘膜上皮“腔排”现象电镜观察结果
        3.5.3 输卵管粘膜上皮细胞免疫组化染色结果
讨论
    4.1 济宁青山羊后发育阶段血清中 E2 和 P 的分泌变化与下丘脑中 ERα、ERβ和 PR阳性细胞的分布特点
    4.2 雌性济宁青山羊生后发育阶段腺垂体细胞的增龄性变化以及与雌、孕激素受体的关系
    4.3 济宁青山羊生后卵巢发育特性以及与雌、孕激素受体的关系研究
        4.3.1 济宁青山羊卵巢的生后发育特点
        4.3.2 雌孕激素受体在青山羊生后发育卵巢中的分布
        4.3.3 雌、孕激素受体及其 mRNA 的表达水平与青山羊生后卵巢发育的关系
    4.4 济宁青山羊子宫内 ERα、ERβ和 PR 的分布及其 mRNA 表达的增龄性变化
        4.4.1 生后发育时期 ERα、ERβ免疫阳性细胞在子宫中的分布特点及其 mRNA 表达
        4.4.2 生后发育时期 PR 免疫阳性细胞在子宫中的分布特点及其 mRNA 表达
        4.4.3 ERα、ERβ和 PR 在子宫发育过程中的作用
    4.5 济宁青山羊生后输卵管壶腹部与伞部粘膜上皮的发育性变化
        4.5.1 济宁青山羊输卵管壶腹部与伞部上皮的生后发育特点
        4.5.2 生殖激素受体在生后发育阶段输卵管壶腹部与伞部上皮中的表达
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]济宁青山羊生后发育阶段GnRH与GnRHR阳性细胞在下丘脑分布规律的研究[J]. 刘宵,王树迎,尹玉涛,张德敏,黄丽波,侯衍猛.  畜牧兽医学报. 2012(08)
[2]鲁西南地区青山羊种质资源调查与分析[J]. 许腾.  中国畜牧兽医. 2011(01)
[3]雌激素受体在老年和青年猕猴下丘脑中表达的比较[J]. 陈正礼,罗启慧,曾文,程安春.  兽类学报. 2010(02)
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[5]湖羊高繁殖力候选基因ESR的研究[J]. 董文艳,陈阿琴,王争光,俞颂东.  浙江农业学报. 2009(06)
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[9]妊娠期牦牛输卵管的组织结构观察[J]. 谭娟,余四九,崔燕.  中国兽医科学. 2008(07)
[10]IFN-γR和ER在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中的共表达[J]. 何书海,赵慧英,乐涛,曾伟伟,李燕丽,周旭,张发.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2007(11)

硕士论文
[1]青山羊生后发育过程中GTH分泌与输卵管中GTH受体表达规律的研究[D]. 李泰云.山东农业大学 2011
[2]雌激素受体亚型在子宫内膜异位症在位内膜及小白鼠模型中的表达及意义[D]. 张翼海.中国医科大学 2009
[3]莱芜黑山羊松果体与下丘脑的组织学与免疫组织化学的研究[D]. 王凌燕.山东农业大学 2006



本文编号：3514519