牛源多杀性巴氏杆菌A、B型菌株转录组学分析、优势抗原筛选及间接ELISA方法建立
发布时间：2021-11-25 02:54
牛巴氏杆菌病又称牛出血性败血症,简称牛出败,（Haemorrhagic septicaemia of cattle,HSC）,是由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）引起的普遍流行于牛和水牛的高致病性、高死亡率传染病,对养牛业构成严重威胁。国内引起牛出败的病原菌主要为荚膜血清A群及B群的Pm菌株,而目前有关两种血清型致病机制的区别尚不清楚。2016年末本实验室收到北京和山东两个奶牛场送检的各1头病死成年牛组织,通过将病死牛组织感染小鼠,小鼠死亡后取组织染色镜检、接种血清TSA和麦康凯培养基,分离到2株疑似多杀性巴氏杆菌,命名为Pm1和Pm2。经细菌培养特性及形态检验、生化试验、16S rRNA基因测序、多杀性巴氏杆菌种特异性PCR、荚膜A、B血清群特异性PCR、脂多糖基因分型PCR、荚膜A群透明脂酸抑制试验鉴定其为荚膜血清A群、脂多糖3型多杀性巴氏杆菌。为探究A、B两种血清群的差异,本课题利用RNA-seq技术对荚膜血清A群菌株Pm1与B群菌株CVCC448转录组测序并进行了系统分析。结果发现,两株菌株的同源基因中有810个显著差异基因,B群菌株相对于A群...
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
涂片染色结果
2.3.4 16S rRNA 基因测序Pm1 和 Pm2 分离株的 4 个 PCR 样品均测出长约 1400nt 的序列。通过 NCBI 的Blast 搜索，这 4 条序列与 GenBank 中多杀性巴氏杆菌 16S rRNA 基因序列的同源性均为 99-100％，3 株 CVCC 参考株测序也得出同样结果。同时将 Pm1 和 Pm2 的 16S rRNA 序列上传至 NCBI 获取其 GenBank 登录号：Pm（MH150893）、Pm2（MH150894）。2.3.5 PCR 鉴定 Pm 种、荚膜分群和脂多糖基因型结果见图 2-2。三组 PCR 中阴性对照都无扩增。分离株 Pm1、Pm2 和 3 个参考株都扩增出约 0.5 kb（460 bp）的 Pm 种特异性条带；荚膜分群 PCR 中 CVCC1672群参考株与 A、B 群引物都不反应，分离株 Pm1 和 Pm2 扩增出约 1 kb（1044 bp）的荚膜 A 群条带，CVCC448 和 1668（B 群）扩增出约 0.8kb（760 bp）的荚膜 B 群条带。脂多糖基因型鉴定 PCR 显示参考株 CVCC1672（A 群）不产生任何条带，分离株 Pm1 和 Pm2 扩增出约 0.5kb（474 bp）的脂多糖 3 型条带，CVCC448（B 群）和1668（B 群）扩增出约 0.8kb（810 bp）的脂多糖 2 型条带。
显；CVCC448（B 群）则未被抑制，与预期相符。该试验重复过 4 次，C2 次弱阳性，2 次阴性，新分离菌和阴性对照 4 次结果相同。本试验用，即有文献介绍的金黄色葡萄球菌和我们实验室常用于给某些细菌提皮葡萄球菌。试验发现表皮葡萄球菌抑制透明脂酸的作用更明显些。
【参考文献】：
期刊论文
[1]犊牛支原体肺炎继发牛A型多杀性巴氏杆菌感染的诊治[J]. 赖金伦,寇明明,刘玉辉,朱习芳,刘婧,姜鹏,陈颖钰,胡长敏,郭爱珍. 中国畜牧兽医. 2015(11)
[2]7株牛源A型巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 王梓,孔令聪,贾博岩,刘树明,马红霞. 中国兽药杂志. 2015(07)
[3]牛出血性败血症的流行特点及防治[J]. 董永华. 中国畜牧兽医文摘. 2014(08)
[4]6株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定[J]. 杨宝凤,李能章,邹灵秀,黄园媛,吴建云,王自力,魏学良,彭远义. 中国预防兽医学报. 2014(06)
[5]转录组学在药用植物研究中的应用[J]. 吴琼,孙超,陈士林,罗红梅,李滢,孙永珍,牛云云. 世界科学技术(中医药现代化). 2010(03)
[6]牛荚膜血清A型巴氏杆菌病的分子流行病学调查[J]. 马文戈,姜志刚,于力. 中国预防兽医学报. 2010(05)
[7]牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定[J]. 马文戈,于力. 中国预防兽医学报. 2008(10)
[8]重组产毒多杀性巴氏杆菌毒素PMT的N-端和C-端蛋白的生物学活性及免疫原性[J]. 汤细彪,吴斌,赵战勤,邓永,何华,何启盖,陈焕春. 微生物学报. 2008(02)
[9]猪源产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆与特征（英文）[J]. 李良军,黎璐,李健,张四化,吴斌,陈焕春,周锐. 农业生物技术学报. 2007(02)
[10]鸽源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定[J]. 毛跟年,许牡丹,杨秀芳. 西北农业学报. 1999(03)
博士论文
[1]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013
硕士论文
[1]大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证[D]. 林敏玲.广西大学 2016
[2]猪多杀性巴氏杆菌PlpB与Fur基因融合表达及免疫效果评价[D]. 蒋惠婷.黑龙江八一农垦大学 2014
[3]鸭多杀性巴氏杆菌OmpH单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立[D]. 卢艳.黑龙江八一农垦大学 2012
[4]致犊牛肺炎多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究[D]. 马晓菁.石河子大学 2010
[5]猪源多杀性巴氏杆菌体内表达基因的筛选及间接ELISA方法的建立[D]. 黄先奇.四川农业大学 2009
[6]嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氧还蛋白系统的表达纯化及定点突变[D]. 王亿平.中南大学 2009
本文编号：3517264
【文章来源】：江西农业大学江西省
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
涂片染色结果
2.3.4 16S rRNA 基因测序Pm1 和 Pm2 分离株的 4 个 PCR 样品均测出长约 1400nt 的序列。通过 NCBI 的Blast 搜索，这 4 条序列与 GenBank 中多杀性巴氏杆菌 16S rRNA 基因序列的同源性均为 99-100％，3 株 CVCC 参考株测序也得出同样结果。同时将 Pm1 和 Pm2 的 16S rRNA 序列上传至 NCBI 获取其 GenBank 登录号：Pm（MH150893）、Pm2（MH150894）。2.3.5 PCR 鉴定 Pm 种、荚膜分群和脂多糖基因型结果见图 2-2。三组 PCR 中阴性对照都无扩增。分离株 Pm1、Pm2 和 3 个参考株都扩增出约 0.5 kb（460 bp）的 Pm 种特异性条带；荚膜分群 PCR 中 CVCC1672群参考株与 A、B 群引物都不反应，分离株 Pm1 和 Pm2 扩增出约 1 kb（1044 bp）的荚膜 A 群条带，CVCC448 和 1668（B 群）扩增出约 0.8kb（760 bp）的荚膜 B 群条带。脂多糖基因型鉴定 PCR 显示参考株 CVCC1672（A 群）不产生任何条带，分离株 Pm1 和 Pm2 扩增出约 0.5kb（474 bp）的脂多糖 3 型条带，CVCC448（B 群）和1668（B 群）扩增出约 0.8kb（810 bp）的脂多糖 2 型条带。
显；CVCC448（B 群）则未被抑制，与预期相符。该试验重复过 4 次，C2 次弱阳性，2 次阴性，新分离菌和阴性对照 4 次结果相同。本试验用，即有文献介绍的金黄色葡萄球菌和我们实验室常用于给某些细菌提皮葡萄球菌。试验发现表皮葡萄球菌抑制透明脂酸的作用更明显些。
【参考文献】：
期刊论文
[1]犊牛支原体肺炎继发牛A型多杀性巴氏杆菌感染的诊治[J]. 赖金伦,寇明明,刘玉辉,朱习芳,刘婧,姜鹏,陈颖钰,胡长敏,郭爱珍. 中国畜牧兽医. 2015(11)
[2]7株牛源A型巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 王梓,孔令聪,贾博岩,刘树明,马红霞. 中国兽药杂志. 2015(07)
[3]牛出血性败血症的流行特点及防治[J]. 董永华. 中国畜牧兽医文摘. 2014(08)
[4]6株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定[J]. 杨宝凤,李能章,邹灵秀,黄园媛,吴建云,王自力,魏学良,彭远义. 中国预防兽医学报. 2014(06)
[5]转录组学在药用植物研究中的应用[J]. 吴琼,孙超,陈士林,罗红梅,李滢,孙永珍,牛云云. 世界科学技术(中医药现代化). 2010(03)
[6]牛荚膜血清A型巴氏杆菌病的分子流行病学调查[J]. 马文戈,姜志刚,于力. 中国预防兽医学报. 2010(05)
[7]牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定[J]. 马文戈,于力. 中国预防兽医学报. 2008(10)
[8]重组产毒多杀性巴氏杆菌毒素PMT的N-端和C-端蛋白的生物学活性及免疫原性[J]. 汤细彪,吴斌,赵战勤,邓永,何华,何启盖,陈焕春. 微生物学报. 2008(02)
[9]猪源产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株外膜蛋白H的基因克隆与特征（英文）[J]. 李良军,黎璐,李健,张四化,吴斌,陈焕春,周锐. 农业生物技术学报. 2007(02)
[10]鸽源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定[J]. 毛跟年,许牡丹,杨秀芳. 西北农业学报. 1999(03)
博士论文
[1]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013
硕士论文
[1]大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制剂蛋白的抗原表位验证[D]. 林敏玲.广西大学 2016
[2]猪多杀性巴氏杆菌PlpB与Fur基因融合表达及免疫效果评价[D]. 蒋惠婷.黑龙江八一农垦大学 2014
[3]鸭多杀性巴氏杆菌OmpH单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立[D]. 卢艳.黑龙江八一农垦大学 2012
[4]致犊牛肺炎多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究[D]. 马晓菁.石河子大学 2010
[5]猪源多杀性巴氏杆菌体内表达基因的筛选及间接ELISA方法的建立[D]. 黄先奇.四川农业大学 2009
[6]嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氧还蛋白系统的表达纯化及定点突变[D]. 王亿平.中南大学 2009
本文编号：3517264
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