玉米赤霉烯酮对小鼠B淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响

发布时间：2021-11-26 00:29

　　为了探究玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）对离体B淋巴细胞活化、增殖及分化的影响,试验以BALB/c小鼠脾脏B淋巴细胞为材料,分设细胞空白对照组（Control）、脂多糖对照组（LPS 5?g/m L）、不同浓度ZEA染毒组（LPS+10、20或30?mol/L ZEA）,CCK-8法检测24 h时细胞相对活性,流式细胞术分别检测6 h、72 h时淋巴细胞活化标识分子CD69、CD71的表达量,以及72 h时浆细胞表面标识分子CD138的表达量,CFSE法检测B淋巴细胞的增殖情况。结果显示,ZEA在终浓度10、20、30?mol/L下均可显著或极显著地降低LPS诱导的B细胞相对活性,并导致细胞表面标识分子CD69、CD71、CD138的表达量下降（P<0.05或P<0.01）。此外,ZEA还可抑制B细胞的增殖,且呈剂量效应关系。结论认为,玉米赤霉烯酮可直接通过抑制小鼠B淋巴细胞的活化、增殖、分化,影响体液免疫的进程,从而对动物机体产生免疫抑制作用。 

【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(12)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

淋巴细胞纯度鉴定Figure1TheidentificationofBlymphocytespurity00050100102103104105106（×104）APC-AFSC-A

中国兽医科学第50卷图1B淋巴细胞纯度鉴定Figure1TheidentificationofBlymphocytespurity图2ZEA对LPS诱导的B细胞活性的影响Figure2TheeffectsofZEAonrelativesurvivalinLPS-mediatedBcellLPS组与空白对照组相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。染毒组与LPS组相比，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。下同。LPSgroupwascomparedwiththecontrolgroup，#indicatesP＜0.05，##indicatesP＜0.01.ThetreatmentgroupswascomparedwiththeLPSgroup，*indicatesP＜0.05，**indicatesP＜0.01.Thesameasbelow.72h后，取样离心，冷PBS清洗2次后将细胞悬液浓缩至100L，分别加入CD19-APC、CD69-FITC、CD71-PE、CD138-BV421单克隆抗体各1g，4℃下避光孵育30min，用冷PBS离心洗涤2次，重悬于300L的PBS中，立即上流式细胞仪检测。1.7CFSE标记法检测细胞增殖将1.3项的淋巴细胞悬液用冷的PBS洗2次，用PBS配置成107/mL的单细胞悬液，加入CFSE染色工作液（终浓度为5mol/L）至细胞中，37℃避光水浴15min后加入9mLPBS洗涤1次，再加入10mLRPMI1640完全培养基洗涤1次，用培养基重悬后，于37℃，CO2培养箱中培养72h后，用冷的PBS洗涤2次，重悬于300L的PBS中，流式细胞仪检测。1.8统计学分析所有数据以均数±标准差表示，用SPSS22.0软件进行单因素方差分析，组间比较采用配对t检验，P＜0.05作为差异显著性判断标准。2结果2.1B淋巴细胞纯度鉴定将免疫磁珠分选后的B淋巴细胞用CD19-APC标记后，流式进行检测，结果如图1所示，细胞纯度可达到95％以上，满足后续实验要求。2.2ZEA对小鼠B淋巴细胞活性的影响小鼠B淋巴细胞培养24h后，加入CCK-8检测液，每孔10L，于37℃、CO2培养箱中培养4h后用酶标仪在450nm处测定吸光度。结果如图2，可见加

第12期刘双双等：玉米赤霉烯酮对小鼠B淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响图3ZEA对LPS诱导的B细胞CD69表达的影响Figure3TheeffectsofZEAonexpressionofCD69inLPS-mediatedBcellA：ZEA对LPS诱导的B细胞CD69表达的影响；B：不同处理组CD19＋CD69＋占CD19＋总细胞比例。A：TheeffectofZEAontheexpressionofCD69inLPS-mediatedBcells；B：TheproportionofCD19＋CD69＋ofaccountedfortotalCD19＋cellsindifferenttreatmentgroups.图4ZEA对LPS诱导的B细胞表达CD71的影响Figure4TheeffectsofZEAonexpressionofCD71inLPS-mediatedBcellA：ZEA对LPS诱导的B细胞CD71表达的影响；B：不同处理组CD19＋CD71＋占CD19＋总细胞比例。A：TheeffectofZEAontheexpressionofCD71inLPS-mediatedBcells；B：TheproportionofCD19＋CD71＋ofaccountedfortotalCD19＋cellsindifferenttreatmentgroups.CD71表达量极显著升高（P＜0.01）。ZEA各染毒组与LPS组相比，B细胞CD71表达量均显著或极显著下降（P＜0.05或P＜0.01），且呈剂量依赖效应。2.5ZEA对小鼠B淋巴细胞CD138表达的影响小鼠B淋巴细胞培养72h后，流式细胞术检测浆细胞表面标识分子CD138的表达。结果如图5，与空白对照组相比，B细胞在LPS刺激72h后CD138表达量极显著升高（P＜0.01）。ZEA各染毒组与LPS组相比，B细胞CD138表达量均极显著下降（P＜0.01），且呈剂量依赖效应。2.6ZEA对小鼠B淋巴细胞体外增殖影响将标记过CFSE的B淋巴细胞培养72h后，流式细胞仪检测B淋巴细胞的增殖。结果如图6，在LPS刺激72h后，与空白对照组相比，原代B淋巴细胞的比例极显著下降（P＜0.01）。加入ZEA后，各染毒组与LPS组相比原代B淋巴细胞的比例均显著或极显著升高（P＜0.05

【参考文献】：
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本文编号：3519076