牛原精中死精去除方法研究及其在精子分离—性控冻精生产中的应用

发布时间：2021-11-28 01:09

　　本研究应用PureSperm离心法和上游法进行流式细胞仪分离牛原精去除死精子方法研究,目的是通过去除原精中的死精子进一步提高牛精子分离-性控冻精生产效率。实验结果：①PureSperm离心法处理原精后死精率降低（原精：处理组=24.96%vs13.45%）,但解冻后活力（原精：处理组=0.38vs0.31）和存活时间（原精处理组=4.34h vs3.59h）下降。②上游法精子浮游活力呈垂直分布,底部至顶部精子活力逐步提高、精子数量逐步下降。上游法处理原精后死精率（原精：处理组=14.11%vs5.81%）显著下降（P<0.05）,解冻后活力（原精：处理组=0.47vs0.47）及解冻后存活时间（原精：处理组=6.Oh vs6.17h）均无显著差异（P>0.05）。③上游法处理的精液,与原精相比分离效率提升16.19%,但PureSperm法处理后精液分离效率与原精相比没有明显效果。④上游法处理后与原精相比顶体完整性（原精：处理组=0.61vs0.61）、线粒体活性（原精：处理组=0.43vs0.47）、膜完整性（原精：处理组=0.22vs0.26）均无显著差异（P>0... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 流式细胞仪精子分离简介
        1.1.1 流式细胞仪结构简介图
        1.1.2 流式细胞仪分离精子的原理
    1.2 流式细胞仪精子分离法存在问题和应用前景
    1.3 去除死精子技术研究进展
    1.4 研究目的与意义
第二章 PureSperm离心法去死精子及精子分离-性控冻精生产技术研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要仪器设备
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 基础液的配制
        2.1.4 采精、运输和原精保存
    2.2 PureSperm法处理精液
    2.3 精子的染色、分离和冷冻保存
    2.4 解冻后分离精子的评估
        2.4.1 解冻后精子的活力检测
        2.4.2 解冻后精子的存活时间测定
    2.5 数据统计
第三章 上游法去死精子及精子分离-性控冻精生产技术研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要仪器设备
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 基础液的配制
        3.1.4 采精、运输和原精保存
    3.2 上游法处理精液
    3.3 精子的染色结合精子上游法处理
    3.4 精子分离和冷冻保存
    3.5 解冻后分离精子的评估
        3.5.1 解冻后精子的活力检测
        3.5.2 解冻后精子的存活时间测定
        3.5.3 解冻后分离精子的质膜完整性检测
        3.5.4 解冻后分离精子的顶体完整性检测
        3.5.5 解冻后分离精子的线粒体活性检测
    3.6 数据统计
第四章 结果及讨论
    4.1 PureSperm法去死精子及精子分离-性控冻精生产技术研究
        4.1.1 实验结果
        4.1.2 讨论
    4.2 上游法去死精子及精子分离-性控冻精生产技术研究
        4.2.1 实验结果
            4.2.1.1 使用10ml注射器上游法处理
            4.2.1.2 使用60ml注射器上游法处理
            4.2.1.3 精子染色后使用60ml注射器上游法处理
            4.2.1.4 上游法处理后分离精子解冻后质膜完整性、线粒体活性和顶体完整性检测
        4.2.2 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]马鹿X/Y精子分离及人工授精技术研究[J]. 胡树香,王建国,刘树江,张立民,周文忠,孙伟,钱松晋,李煜,李喜和.  中国草食动物. 2009(05)
[2]应用X精子冷冻精液生产体内性控胚胎的试验研究进展[J]. 黄河,李鑫,扈长春,胡莉萍,罗应荣.  中国畜牧兽医. 2005(07)



本文编号：3523391