狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09犬感染模型的建立

发布时间：2021-11-28 04:22

　　狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）引起的一种急性、接触性、高致死率人畜共患传染病。该病主要侵害机体的中枢神经系统（Central nervous system,CNS）。它可以分为狂躁型和麻痹型两种,其中以狂躁、恐水及流涎等临床症状为代表的狂躁型狂犬病最为常见。RABV几乎能够感染所有温血动物,呈世界性流行,一旦发病,其死亡率高达100%。迄今为止,狂犬病仍然是影响全球公共卫生安全的因素之一,它不仅每年引起60,000左右的人死亡,而且给全世界造成巨大的经济损失。暴露前后的免疫接种是预防和控制狂犬病的主要措施,但是近些年来,对犬的管理放松了警惕、流浪犬以及野生动物的入侵,使狂犬病再度流行。RABV的致病机制尚不清楚,且对犬的RABV街毒株模型研究甚少,严重的制约了ⅠRABV致病机理研究以及新型疫苗的研制与开发。因此,亟需建立规范可靠、可重复的犬的狂犬病感染模型。鉴于此,本试验通过使用中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所涂长春研究员分离到的狂犬病街毒（Zhu et al2011）接种6周龄的比格犬,饲养观察3个月,建立犬的感染模型,并对此模型进行评价研究。... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
第1章 文献综述
    1.1 狂犬病概况
    1.2 狂犬病流行概况
        1.2.1 国外狂犬病流行概况
        1.2.2 国内狂犬病流行概况
    1.3 狂犬病诊断
        1.3.1 狂犬病的临床诊断
        1.3.2 实验室诊断
            1.3.2.1 狂犬病抗原检测
            1.3.2.2 RABV分子生物学检测
        1.3.3 血清学诊断
    1.4 小鼠及犬狂犬病的实验动物进展
    1.5 研究课题的目的与意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞与毒株
        2.1.2 试剂及药品
        2.1.3 培养基的配置
        2.1.4 主要缓冲液及相关试剂的配置
        2.1.5 实验动物
        2.1.6 本实验中所用到的引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 病毒增殖
            2.2.1.1 狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09扩增
            2.2.1.2 CVS-11细胞毒的扩增
        2.2.2 病毒滴定
            2.2.2.1 小鼠颅内接种DRV-SX-09病毒滴定
            2.2.2.2 CVS-11滴度的测定
        2.2.3 犬唾液的采集及处理
        2.2.4 唾液总RNA的提取及RT-PCR扩增目的片段
            2.2.4.1 总RNA提取
            2.2.4.2 PCR灵敏度分析鉴定
            2.2.4.3 RT-PCR
        2.2.5 N基因全长扩增
        2.2.6 酶切产物的回收
        2.2.7 N基因片段与载体pET-42b的连接体反应
        2.2.8 连接体系的转化
        2.2.9 质粒的小量提取
        2.2.10 质粒酶切鉴定
        2.2.11 动物实验及样品采集
            2.2.11.1 攻毒前动物预处理
            2.2.11.2 实验分组
            2.2.11.3 犬血液的采集
            2.2.11.4 犬脑脊液的采集
            2.2.11.5 比格犬脑组织的获取
            2.2.11.6 唾液腺(舌下腺)的获取
            2.2.11.7 其他器官的获取
        2.2.12 病理切片制作
            2.2.12.1 取材
            2.2.12.2 犬脑的固定
            2.2.12.3 脱水、透明及包埋
            2.2.12.4 切片制备
            2.2.12.5 染色和封片
        2.2.13 免疫组化
        2.2.14 荧光抗体中和试验检测犬血清及脑脊液中和抗体
        2.2.15 本实验所用的仪器设备
        2.2.16 试验废物的处理
第3章 结果与分析
    3.1 阳性质粒的构建及检测引物PCR灵敏度鉴定分析
        3.1.1 狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09 N基因序列的扩增
        3.1.2 重组质粒的双酶切鉴定
        3.1.3 检测引物的鉴定
        3.1.4 PCR灵敏度检测分析
    3.2 狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09小鼠MICLD_(50)的测定
    3.3 比格犬感染RABV的临床表现
    3.4 犬的唾液排毒情况检测
    3.5 犬的血常规检测结果
    3.6 犬的脑脊液常规检测
    3.7 犬的脑脊液和血清的中和抗体水平
    3.8 犬体内病毒分布情况
    3.9 犬脑组织的病理检测结果
    3.10 免疫组化法检测病毒的分布
第4章 讨论
    4.1 发病犬唾液排毒情况的鉴定分析
    4.2 病毒在发病犬体内分布情况
    4.3 犬发病前后中和抗体水平分析
    4.4 发病前后血液和脑脊液生化分析
    4.5 发病犬的脑组织病理学分析
    4.6 发病犬脑内病毒的分布情况分析
第5章 结论
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于RIG-I的狂犬病病毒免疫逃逸机制[J]. 王林栋,张守峰,刘晔,扈荣良.  中国生物制品学杂志. 2013(10)
[2]2013年中国狂犬病年会纪实[J]. 李刚,郭守堂.  中国工作犬业. 2013(06)
[3]1996-2009年中国狂犬病流行病学分析[J]. 吴慧,宋淼,申辛欣,唐青,王束玫.  疾病监测. 2011(06)
[4]全球狂犬病流行概况及其防制策略[J]. 王敏,许培扬,池慧.  医学研究杂志. 2006(10)
[5]2005年中国人间狂犬病流行特征及分析[J]. 许真,唐青,宋淼,殷文武,王茂武.  疾病监测. 2006(07)
[6]狂犬病的分子生物学诊断[J]. 殷相平,柳纪省,胡永浩,张兴旺,李志勇,王辉,李宝玉,兰喜.  中国兽医科技. 2004(05)
[7]狂犬病诊断技术现状[J]. 熊火.  绵阳经济技术高等专科学校学报. 2000(02)



本文编号：3523695