布鲁菌BAB基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

发布时间：2021-12-09 23:22

　　本研究以布鲁菌Rev.1株基因组为模板,扩增BAB基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a（+）,获得重组质粒pET-30a-BAB,对重组质粒进行原核表达,经Western blotting检测后,利用表达产物构建检测布鲁菌病的间接ELISA方法。结果表明,本试验成功克隆并表达了BAB基因,纯化表达产物经SDS-PAGE分析显示,本研究获得较纯的重组BAB蛋白;Western blotting试验表明,表达蛋白可与布鲁菌羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;以重组BAB蛋白作为包被抗原,建立并优化了检测BAB抗体的间接ELISA方法。确定最佳包被条件:BAB蛋白包被量0.25μg/mL,血清稀释度为1∶400;封闭液为3%猪源明胶;二抗稀释度为1∶6 000;显色时间为10 min。应用建立方法对临床40份羊血清进行检测,计算得出临界值为0.607。即当待检血清的P/N≥1.5,且D_{450 nm}≥0.607时,判定为阳性,当D_{450 nm}≤0.561时,判定为阴性,当0.607<D_{450 nm}<... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(11)北大核心

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

方阵法试验结果

抗原抗体反应时间的确定

TMB显色液稀释倍数的确定

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]流产布鲁菌BABRS22915与BABRS27735基因定向缺失株的构建及生物学特性的研究[D]. 鲍衍清.中国农业科学院 2017

硕士论文
[1]宿主Prdx6与生殖系统相关细胞内布鲁氏菌寄生关系的研究[D]. 翟菲菲.吉林大学 2019



本文编号：3531495