贾第鞭毛虫LAMP检测方法的建立与应用
发布时间：2021-12-11 18:06
贾第鞭毛虫是一种常见的肠道原虫,其宿主范围非常广泛,可引起包括人在内的多种哺乳动物腹泻,主要通过食物和水传播。贾第鞭毛虫病呈世界性分布,自20世纪70年代以来,世界各地常有贾第鞭毛虫病的流行与暴发,因贾第虫病曾在国际旅游者中流行,故被称为“旅游者腹泻”,现己列为全世界危害人类健康的10种主要寄生虫病之一。随着社会的不断发展,人与动物的关系越来越紧密,直接接触或间接接触的不断增多,一些家畜、伴侣动物和野生动物作为该原虫的保虫宿主对人类卫生健康的潜在威胁日渐增长。目前,国内对于贾第鞭毛虫的检测多为形态观察或基于PCR扩增的检测方法,前者漏检率较高,后者对于仪器的精密度要求较为严格,成本较高且用时长。本文利用环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技术建立了特异,高效、成本低廉的检测贾第鞭毛虫的方法,并加以应用。1.通过形态学观察和PCR检测方法鉴定了犬贾第鞭毛虫,利用PCR扩增了贾第鞭毛虫的磷酸丙糖异构酶基因（Triose phosphate isomerase, TPI）和p-贾第素基因（β-giardin）,并将其克隆入...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略表
前言
第一篇 文献综述
第一章 贾第鞭毛虫病及其病原的检测
1 病原
2 流行因素
2.1 社会因素
2.2 自然因素
3 检测贾第鞭毛虫的方法
3.1 病原学诊断
3.2 免疫学诊断
3.3 分子生物学诊断
4 磷酸丙糖异构酶基因(TPI基因)
5 β-贾第素基因(β-giardin基因)
参考文献
第二章 环介导等温扩增技术(LAMP)的研究进展
1 环介导等温扩增技术(LAMP)
1.1 环介导等温扩增技术的特点
1.2 环介导等温扩增技术的作用原理
2 环介导等温扩增技术的应用
3 展望
参考文献
第二篇 试验研究
第三章 贾第鞭毛虫的分离与鉴定
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 显微观察
2.2 PCR扩增
3 讨论
参考文献
第四章 基于TPI基因LAMP检测方法的建立
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 LAMP扩增
2.2 常规PCR扩增
2.3 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定
2.4 测序结果分析
2.5 LAMP反应与PCR反应敏感性对比结果
2.6 LAMP反应特异性结果
3 讨论
参考文献
第五章 基于β-giardin基因LAMP检测方法的建立
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 LAMP扩增
2.2 常规PCR扩增
2.3 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定
2.4 测序结果分析
2.5 LAMP反应与PCR反应敏感性对比结果
2.6 LAMP反应特异性结果
3 讨论
参考文献
第六章 LAMP检测方法的应用
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 镜检
2.2 常规PCR检测
2.3 LAMP检测
3 讨论
参考文献
全文总结
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬贾第虫巢式PCR检测方法的建立[J]. 李棕松,高珺珊,翟涛,吴威,宫鹏涛,李建华,杨举,李赫,张国才,张西臣. 中国生物制品学杂志. 2013(11)
[2]猴痘病毒LAMP检测方法的研究[J]. 吕沁风,郑伟,吴忠华,罗鹏,何蕾,徐琦,李禾. 中国卫生检验杂志. 2013(05)
[3]蓝氏贾第鞭毛虫检测技术研究进展[J]. 邓明俊,肖西志,孙涛,孙敏,郑小龙,王群,张晓文,孙明君,朱来华. 动物医学进展. 2012(12)
[4]LAMP（环介导等温扩增）的原理及在寄生虫检测上的应用[J]. 史亚东,赵子方,朱丹,张龙现,宁长申,菅复春. 中国人兽共患病学报. 2011(10)
[5]猪圆环病毒2型环介导等温扩增（LAMP）检测方法的研究[J]. 何逸民,邹国秋,张得玉,罗玉均,曹宗喜,何冉娅,秦宏阳,孔留五,张桂红. 中国兽医杂志. 2009(12)
[6]用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫[J]. 丁慧萍,卢思奇,戎煜,李凤舞,王凤云. 寄生虫与医学昆虫学报. 2002(02)
[7]犬贾第虫包囊的分离与鉴定[J]. 何宏轩,张西臣,喻建军,陈建宝. 中国兽医寄生虫病. 2002(02)
[8]蓝氏贾第虫分离株tim基因序列分析比较研究（英文）[J]. 卢思奇,文建凡,李继红,王凤云. Chinese Medical Journal. 2002(01)
[9]鼠贾第鞭毛虫中β贾第虫素的研究[J]. 何宏轩. 国外医学(寄生虫病分册). 2000(05)
[10]应用染色体DNA探针检测蓝氏贾第鞭毛虫[J]. 诸欣平. 国外医学(寄生虫病分册). 1991(04)
硕士论文
[1]东北地区部分儿童及奶牛中隐孢子虫和贾第虫感染的分子流行病学调查[D]. 苏艳.吉林大学 2011
[2]四川省部分地区犬贾第虫和隐孢子虫分子遗传特征及其种系发育研究[D]. 胡霖.四川农业大学 2011
[3]河南省部分地区羊贾第虫病流行病学调查以及分离株分子特征研究[D]. 张开放.河南农业大学 2011
本文编号：3535144
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略表
前言
第一篇 文献综述
第一章 贾第鞭毛虫病及其病原的检测
1 病原
2 流行因素
2.1 社会因素
2.2 自然因素
3 检测贾第鞭毛虫的方法
3.1 病原学诊断
3.2 免疫学诊断
3.3 分子生物学诊断
4 磷酸丙糖异构酶基因(TPI基因)
5 β-贾第素基因(β-giardin基因)
参考文献
第二章 环介导等温扩增技术(LAMP)的研究进展
1 环介导等温扩增技术(LAMP)
1.1 环介导等温扩增技术的特点
1.2 环介导等温扩增技术的作用原理
2 环介导等温扩增技术的应用
3 展望
参考文献
第二篇 试验研究
第三章 贾第鞭毛虫的分离与鉴定
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 显微观察
2.2 PCR扩增
3 讨论
参考文献
第四章 基于TPI基因LAMP检测方法的建立
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 LAMP扩增
2.2 常规PCR扩增
2.3 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定
2.4 测序结果分析
2.5 LAMP反应与PCR反应敏感性对比结果
2.6 LAMP反应特异性结果
3 讨论
参考文献
第五章 基于β-giardin基因LAMP检测方法的建立
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 LAMP扩增
2.2 常规PCR扩增
2.3 EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定
2.4 测序结果分析
2.5 LAMP反应与PCR反应敏感性对比结果
2.6 LAMP反应特异性结果
3 讨论
参考文献
第六章 LAMP检测方法的应用
1 材料和方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 镜检
2.2 常规PCR检测
2.3 LAMP检测
3 讨论
参考文献
全文总结
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬贾第虫巢式PCR检测方法的建立[J]. 李棕松,高珺珊,翟涛,吴威,宫鹏涛,李建华,杨举,李赫,张国才,张西臣. 中国生物制品学杂志. 2013(11)
[2]猴痘病毒LAMP检测方法的研究[J]. 吕沁风,郑伟,吴忠华,罗鹏,何蕾,徐琦,李禾. 中国卫生检验杂志. 2013(05)
[3]蓝氏贾第鞭毛虫检测技术研究进展[J]. 邓明俊,肖西志,孙涛,孙敏,郑小龙,王群,张晓文,孙明君,朱来华. 动物医学进展. 2012(12)
[4]LAMP（环介导等温扩增）的原理及在寄生虫检测上的应用[J]. 史亚东,赵子方,朱丹,张龙现,宁长申,菅复春. 中国人兽共患病学报. 2011(10)
[5]猪圆环病毒2型环介导等温扩增（LAMP）检测方法的研究[J]. 何逸民,邹国秋,张得玉,罗玉均,曹宗喜,何冉娅,秦宏阳,孔留五,张桂红. 中国兽医杂志. 2009(12)
[6]用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫[J]. 丁慧萍,卢思奇,戎煜,李凤舞,王凤云. 寄生虫与医学昆虫学报. 2002(02)
[7]犬贾第虫包囊的分离与鉴定[J]. 何宏轩,张西臣,喻建军,陈建宝. 中国兽医寄生虫病. 2002(02)
[8]蓝氏贾第虫分离株tim基因序列分析比较研究（英文）[J]. 卢思奇,文建凡,李继红,王凤云. Chinese Medical Journal. 2002(01)
[9]鼠贾第鞭毛虫中β贾第虫素的研究[J]. 何宏轩. 国外医学(寄生虫病分册). 2000(05)
[10]应用染色体DNA探针检测蓝氏贾第鞭毛虫[J]. 诸欣平. 国外医学(寄生虫病分册). 1991(04)
硕士论文
[1]东北地区部分儿童及奶牛中隐孢子虫和贾第虫感染的分子流行病学调查[D]. 苏艳.吉林大学 2011
[2]四川省部分地区犬贾第虫和隐孢子虫分子遗传特征及其种系发育研究[D]. 胡霖.四川农业大学 2011
[3]河南省部分地区羊贾第虫病流行病学调查以及分离株分子特征研究[D]. 张开放.河南农业大学 2011
本文编号：3535144
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