马立克氏病病毒基因UL14的原核表达及在体内外的变化规律
发布时间：2021-12-17 05:23
UL14蛋白是马立克氏病病毒（Marek’s Disease Virus, MDV）所编码的一种被膜蛋白,在疱疹病毒家族中是高度同源的。虽然UL14的基因编码区域与UL13有重叠,但重叠区域只编码长度可变、高度不保守的C端,高度同源的基因序列分布在不重叠的区域。在1型单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus1, HSV1）中,UL14不仅具有抗细胞凋亡的作用还具有热休克蛋白（Host shock protein, HSP）的功能并可以调节病毒的复制。马立克氏病（Marek’s Disease, MD）是由MDV引起的一种鸡的高度接触、传染性的恶性肿瘤性疾病,能够引起内脏和皮肤肿瘤,侵害中枢神经系统,是禽类重要的肿瘤性疾病之一。MD是研究肿瘤性疾病理想的动物模型。本研究应用基因芯片技术和荧光定量PCR方法检测MDV感染过程中UL14基因的动力学变化,发现UL14呈现显著的差异表达,且超强毒株RB1B与疫苗株CVI988的UL14表达表现不同的动力学变化。1.马立克氏病病毒基因在鸡胸腺组织中的转录表达图谱MDV是一种高度细胞结合性、致肿瘤性α疱疹病毒,以引起T细胞瘤为特征。通...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
符号说明
文献综述
综述一 马立克氏病与马立克氏病病毒的研究进展
1. MID的演变
2. MDV在体内的感染过程
3. MD感染水平的影响因素
4. MDV的致病因子与致病机理
5. 宿主的抗感染免疫应答
6. MD疫苗的使用和MDV病毒的进化
7. 遗传育种
综述二 UL14蛋白的研究进展
1. UL14蛋白对病毒复制的影响
2. UL14蛋白调节病毒被膜和衣壳结构蛋白的核转位功能
3. UL14蛋白的类热休克蛋白功能
4. UL14蛋白的抗凋亡作用
研究内容 一 马立克氏病病毒基因在鸡胸腺组织中的转录表达
摘要
1. 材料
1.1 病毒、实验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2. 方法
2.1 动物实验
2.2 总RNA的提取
2.3 总RNA纯化
2.4 样品RNA的放大和标记
2.5 芯片杂交
2.6 结果扫描
2.7 UL14基因分析
3. 结果
3.1 MDV基因转录表达图谱
3.2 UL14基因分析结果
4. 讨论
研究内容二 UL14蛋白的原核表达及多抗血清的制备
摘要
1. 材料
1.1 菌株、病毒与细胞
1.2 试剂与载体
1.3 主要溶液的配制
1.4 主要培养基与试剂的配制
1.5 主要仪器
1.6 引物的设计合成
2. 方法
2.1 目的基因UL14的扩增
2.2 PCR产物的回收与纯化
2.3 感受态细胞的制备
2.4 目的片段与pGEM-T-easy载体的连接转化
2.5 重组质粒pGEM-T-UL14的筛选与鉴定
2.6 原核表达载体的构建
2.7 UL14蛋白的原核表达
2.8 融合蛋白的纯化
2.9 SDS-PAGE电泳及Western blot分析
2.10 制备抗UL14多抗血清
2.11 IFA鉴定抗UL14多抗血清的反应性
3. 结果
3.1 UL14基因的扩增与鉴定
3.2 重组质粒pET-32a-UL14的酶切鉴定
3.3 融合蛋白的表达
3.4 融合蛋白的纯化及Western blot分析
3.5 IFA和Western blot检测多抗血清的反应性
4. 讨论
研究内容三 UL14在马立克氏病病毒感染CEF细胞及鸡组织内的变化规律
摘要
1. 材料
1.1 病毒、细胞及实验动物
1.2 主要试剂
1.3 引物设计与合成
1.4 主要仪器
2. 方法
2.1 总RNA的提取
2.2 实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.3 感染细胞中基因水平的检测
2.4 Western blot检测感染细胞中蛋白水平的变化
2.5 不同感染组织中基因表达水平检测
3. 结果
3.1 实时荧光定量PCR的特异性
3.2 实时荧光定量PCR的重复性
3.3 CEF细胞中基因表达水平
3.4 MDV感染的CEF细胞中蛋白表达水平
3.5 不同感染组织中基因表达水平
4. 讨论
全文总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录
本文编号：3539478
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
目录
符号说明
文献综述
综述一 马立克氏病与马立克氏病病毒的研究进展
1. MID的演变
2. MDV在体内的感染过程
3. MD感染水平的影响因素
4. MDV的致病因子与致病机理
5. 宿主的抗感染免疫应答
6. MD疫苗的使用和MDV病毒的进化
7. 遗传育种
综述二 UL14蛋白的研究进展
1. UL14蛋白对病毒复制的影响
2. UL14蛋白调节病毒被膜和衣壳结构蛋白的核转位功能
3. UL14蛋白的类热休克蛋白功能
4. UL14蛋白的抗凋亡作用
研究内容 一 马立克氏病病毒基因在鸡胸腺组织中的转录表达
摘要
1. 材料
1.1 病毒、实验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
2. 方法
2.1 动物实验
2.2 总RNA的提取
2.3 总RNA纯化
2.4 样品RNA的放大和标记
2.5 芯片杂交
2.6 结果扫描
2.7 UL14基因分析
3. 结果
3.1 MDV基因转录表达图谱
3.2 UL14基因分析结果
4. 讨论
研究内容二 UL14蛋白的原核表达及多抗血清的制备
摘要
1. 材料
1.1 菌株、病毒与细胞
1.2 试剂与载体
1.3 主要溶液的配制
1.4 主要培养基与试剂的配制
1.5 主要仪器
1.6 引物的设计合成
2. 方法
2.1 目的基因UL14的扩增
2.2 PCR产物的回收与纯化
2.3 感受态细胞的制备
2.4 目的片段与pGEM-T-easy载体的连接转化
2.5 重组质粒pGEM-T-UL14的筛选与鉴定
2.6 原核表达载体的构建
2.7 UL14蛋白的原核表达
2.8 融合蛋白的纯化
2.9 SDS-PAGE电泳及Western blot分析
2.10 制备抗UL14多抗血清
2.11 IFA鉴定抗UL14多抗血清的反应性
3. 结果
3.1 UL14基因的扩增与鉴定
3.2 重组质粒pET-32a-UL14的酶切鉴定
3.3 融合蛋白的表达
3.4 融合蛋白的纯化及Western blot分析
3.5 IFA和Western blot检测多抗血清的反应性
4. 讨论
研究内容三 UL14在马立克氏病病毒感染CEF细胞及鸡组织内的变化规律
摘要
1. 材料
1.1 病毒、细胞及实验动物
1.2 主要试剂
1.3 引物设计与合成
1.4 主要仪器
2. 方法
2.1 总RNA的提取
2.2 实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.3 感染细胞中基因水平的检测
2.4 Western blot检测感染细胞中蛋白水平的变化
2.5 不同感染组织中基因表达水平检测
3. 结果
3.1 实时荧光定量PCR的特异性
3.2 实时荧光定量PCR的重复性
3.3 CEF细胞中基因表达水平
3.4 MDV感染的CEF细胞中蛋白表达水平
3.5 不同感染组织中基因表达水平
4. 讨论
全文总结
参考文献
致谢
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本文编号：3539478
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