T-2毒素抑制GH3细胞生长激素合成与分泌的基因组和蛋白组研究
发布时间：2021-12-18 23:01
T-2毒素属于单端孢霉烯族化合物,是这类毒素中毒性最强的一种,是污染饲料的主要的霉菌毒素,对人、畜禽健康和畜牧业生产造成严重的危害。急性暴露单端孢毒素可导致呕吐和腹泻,长期暴露可致机体厌食,抑制生长,造成内分泌系统和免疫系统等损伤严重。动物实验结果发现,T-2毒素的靶器官之一是动物的脑垂体,实验室前期研究表明,T-2毒素可以抑制大鼠垂体瘤GH3细胞生长激素的分泌,生长激素对于脊椎动物的生长调控起重要作用。目前,T-2毒素对动物生长抑制机制的研究并不深入,其影响生长激素的合成和分泌机制并未得到很好的揭示。现今,基因组和蛋白组学技术已成为研究毒理作用机理和寻找靶点的新手段。鉴于T-2毒素抑制生长毒性的重要性,本研究选择中低剂量(10nM和40nM)的T-2毒素暴露大鼠垂体瘤GH3细胞为实验材料,运用安捷伦大鼠44K基因芯片和双向电泳-质谱鉴定技术相结合,筛选T-2毒素作用于GH3细胞后的差异基因和差异蛋白,分析与抑制生长毒性作用相关的基因、蛋白及抑制生长激素合成与分泌的分子机制。为今后国内外T-2毒素的研究提供参考,进而为食品安全和控制靶点提供科学依据。 1.毒素的选择和毒素作用时间和浓度...
【文章来源】： 华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：165 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
縮略语表
1 前言
1.1 立题依据
1.2 国内外研究现状与发展趋势
1.2.1 T-2毒素的化学组成及危害
1.2.2 单端孢毒素抑制生长的机理
1.2.3 T-2毒素毒性机制的研究方法
1.3 目的意义
2 材料与方法
2.1 细胞株
2.2 主要试剂
2.3 主要仪器设备
2.4 主要溶液的配制
2.5 细胞培养及冻存
2.6 MTT筛选对GH3细胞毒性最大的单端孢毒素
2.7 毒素作用合适浓度和时间测定(ELISA方法检测生长激素浓度)
2.7.1 待测样本准备
2.7.2 操作步骤
2.8 毒素作用差异基因的检测(基因芯片)
2.8.1 样品RNA的抽提(TRIZOL法)
2.8.2 cDNA第一链和第二链一步法合成
2.8.3 荧光标记cRNA合成
2.8.4 荧光探针纯化
2.8.5 芯片杂交
2.8.6 芯片洗涤
2.8.7 芯片扫描及数据分析
2.8.8 部分差异基因验证(Real-Time PCR)
2.9 GH3细胞蛋白质二维电泳条件优化及质谱鉴定
2.9.1 细胞处理及分组
2.9.2 GH3细胞蛋白提取方法
2.9.3 蛋白质定量
2.9.4 二维凝胶电泳
2.9.5 图像扫描及分析
2.9.6 蛋白质质谱鉴定
2.9.7 Western Blot方法验证GH和GRP78蛋白表达情况
3 结果与分析
3.1 T-2毒素作用于GH3细胞的毒性最大
3.2 T-2毒素作用合适浓度和时间确定
3.2.1 细胞生存活力的检测
3.2.2 T-2毒素对GH3细胞GH分泌的影响
3.3 T-2作用差异基因的分析(基因芯片)
3.3.1 总RNA质量
3.3.2 芯片质量与结果可靠性分析
3.3.3 毒素作用后差异表达基因
3.3.4 关键基因mRNA表达水平的验证
3.4 T-2毒素作用GH3细胞的差异蛋白分析(双向电泳-质谱)
3.4.1 双向电泳条件的优化
3.4.2 T-2处理GH3细胞的2D图谱
3.4.3 T-2处理GH3细胞2D图谱分析
3.4.4 差异蛋白点的鉴定分析
3.4.5 Western Blot验证GH和BIP蛋白
3.5 基因芯片结果与蛋白组的比对
4 讨论
4.1 T-2毒素作用GH3细胞浓度和时间的确定
4.2 T-2毒素对GH3细胞GH合成分泌的影响
4.2.1 生长激素合成的相关基因和蛋白
4.2.2 生长激素加工相关的基因与蛋白
4.2.3 间接影响GH合成加工的基因与蛋白
4.2.4 生长激素分泌相关基因与蛋白
4.2.5 能量代谢相关基因与蛋白
4.3 T-2毒素作用于GH3细胞的时间关系
4.4 基因芯片与蛋白组学结果之间的关系
5 全文总结
文献综述
1 毒理基因组学
1.1 毒理基因组学的产生及其基本概念
1.2 毒理基因组学的主要技术
1.3 毒理基因组的应用
1.3.1 毒性作用机制的研究
1.3.2 毒作用的量效关系和实效关系的研究
1.3.3 筛选生物标志物
1.3.4 动物毒性的实验结果的外推
1.4 毒理基因组面临的问题挑战
1.5 毒理基因组的发展趋势
2 毒理蛋白组学
2.1 毒理蛋白质组学的概念和相关背景
2.2 毒理蛋白质组学研究的主要技术平台
2.3 毒理蛋白组学的应用
2.3.1 研究外源性物质对生命有机体的毒性机制
2.3.2 筛选化合物毒性评价的生物标志物
2.4 毒理蛋白组学的发展趋势与展望
参考文献
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]基因芯片技术研究Z24对人HepG2细胞基因表达的影响 [J]. 王全军,吴纯启,余寿忠,廖明阳. 中国新药杂志. 2004(02)
本文编号：3543322
【文章来源】： 华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：165 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
縮略语表
1 前言
1.1 立题依据
1.2 国内外研究现状与发展趋势
1.2.1 T-2毒素的化学组成及危害
1.2.2 单端孢毒素抑制生长的机理
1.2.3 T-2毒素毒性机制的研究方法
1.3 目的意义
2 材料与方法
2.1 细胞株
2.2 主要试剂
2.3 主要仪器设备
2.4 主要溶液的配制
2.5 细胞培养及冻存
2.6 MTT筛选对GH3细胞毒性最大的单端孢毒素
2.7 毒素作用合适浓度和时间测定(ELISA方法检测生长激素浓度)
2.7.1 待测样本准备
2.7.2 操作步骤
2.8 毒素作用差异基因的检测(基因芯片)
2.8.1 样品RNA的抽提(TRIZOL法)
2.8.2 cDNA第一链和第二链一步法合成
2.8.3 荧光标记cRNA合成
2.8.4 荧光探针纯化
2.8.5 芯片杂交
2.8.6 芯片洗涤
2.8.7 芯片扫描及数据分析
2.8.8 部分差异基因验证(Real-Time PCR)
2.9 GH3细胞蛋白质二维电泳条件优化及质谱鉴定
2.9.1 细胞处理及分组
2.9.2 GH3细胞蛋白提取方法
2.9.3 蛋白质定量
2.9.4 二维凝胶电泳
2.9.5 图像扫描及分析
2.9.6 蛋白质质谱鉴定
2.9.7 Western Blot方法验证GH和GRP78蛋白表达情况
3 结果与分析
3.1 T-2毒素作用于GH3细胞的毒性最大
3.2 T-2毒素作用合适浓度和时间确定
3.2.1 细胞生存活力的检测
3.2.2 T-2毒素对GH3细胞GH分泌的影响
3.3 T-2作用差异基因的分析(基因芯片)
3.3.1 总RNA质量
3.3.2 芯片质量与结果可靠性分析
3.3.3 毒素作用后差异表达基因
3.3.4 关键基因mRNA表达水平的验证
3.4 T-2毒素作用GH3细胞的差异蛋白分析(双向电泳-质谱)
3.4.1 双向电泳条件的优化
3.4.2 T-2处理GH3细胞的2D图谱
3.4.3 T-2处理GH3细胞2D图谱分析
3.4.4 差异蛋白点的鉴定分析
3.4.5 Western Blot验证GH和BIP蛋白
3.5 基因芯片结果与蛋白组的比对
4 讨论
4.1 T-2毒素作用GH3细胞浓度和时间的确定
4.2 T-2毒素对GH3细胞GH合成分泌的影响
4.2.1 生长激素合成的相关基因和蛋白
4.2.2 生长激素加工相关的基因与蛋白
4.2.3 间接影响GH合成加工的基因与蛋白
4.2.4 生长激素分泌相关基因与蛋白
4.2.5 能量代谢相关基因与蛋白
4.3 T-2毒素作用于GH3细胞的时间关系
4.4 基因芯片与蛋白组学结果之间的关系
5 全文总结
文献综述
1 毒理基因组学
1.1 毒理基因组学的产生及其基本概念
1.2 毒理基因组学的主要技术
1.3 毒理基因组的应用
1.3.1 毒性作用机制的研究
1.3.2 毒作用的量效关系和实效关系的研究
1.3.3 筛选生物标志物
1.3.4 动物毒性的实验结果的外推
1.4 毒理基因组面临的问题挑战
1.5 毒理基因组的发展趋势
2 毒理蛋白组学
2.1 毒理蛋白质组学的概念和相关背景
2.2 毒理蛋白质组学研究的主要技术平台
2.3 毒理蛋白组学的应用
2.3.1 研究外源性物质对生命有机体的毒性机制
2.3.2 筛选化合物毒性评价的生物标志物
2.4 毒理蛋白组学的发展趋势与展望
参考文献
致谢
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]基因芯片技术研究Z24对人HepG2细胞基因表达的影响 [J]. 王全军,吴纯启,余寿忠,廖明阳. 中国新药杂志. 2004(02)
本文编号：3543322
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3543322.html
