水牛PHB、CAPZB和TEKT2基因克隆及其表达水平与精子活率的相关性研究
发布时间：2021-12-25 10:40
长期以来人工授精、精液冷冻保存和体外受精等动物繁殖技术对优良家畜牛、猪、羊和马的快速繁殖和品种改良发挥了重要作用,且对拯救濒危动物以及解决人类的不孕症亦都具有重要意义。广西是水牛养殖大省,随着农业机械化水平提高,水牛役用性价值逐年向肉用性和乳用性调整,广西水牛的品种改良也是水牛生产最重要的环节之一。水牛精液采集生产过程中发现,一些公牛个体的精子活率较低,无法用于水牛品种的杂交与改良。目前对有关影响水牛精子活率的基因及其调控机制研究较少,本研究在已有小鼠、人、牛等动物精子活率相关研究的基础上,初步研究了 PHB、CAPZB、TEKT2基因表达与水牛精子活率的关系。研究结果为进一步阐明这些基因在水牛精子发生过程中的作用及其对水牛精子活率的影响奠定了基础。研究结果如下:水牛PHB、CAPZB和TEKT2基因克隆与分析:以水牛睾丸组织为材料,参考黄牛相关基因序列,设计特异性扩增引物,采用RT-PCR方法扩增获得了水牛PHB、CAPZB和TEKT2基因编码区片段。对克隆片段进行测序并分析,结果显示,水牛基因PHB 948 bp,包含819bp的ORF区,编码272个氨基酸;CAPZB基因958b...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：167 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２哺乳动物精子结构示意图??Ａ图：哺乳动物精子尾部中段横截面示意图｜２Ｉ｜；?Ｂ图哺乳动物精子示意
Ｆｉｇ．?３?Ｔｈｅ?ｍａｊｏｒ?ｓｉｇｎａｌ?ｐａｔｈｓ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?ｓｐｅｒｍ?ｍｏｔｉｏｎ??总之至少有两类不同的钙离子通路存在：其中一条是不依赖于ＣａＭ?（例如??ｓＡＣ／ＰＫＡ），而另一条贝丨Ｊ相反（图３）。艮Ｐ钙离子可以在两个地方发挥作用于同一??条通路。因为ｓＡＣ基因的缺失会引起精子活动力丧失，因此ｓＡＣ功能的缺失是??不能由钙调蛋白（ＣａＭ）代偿的。但是也有实验表明，当ＣａＭ被抑制时，精子??运动可以被回复（通过促进ＰＫＡ通路），因此ｓＡＣ这条通路上钙调蛋白（ＣａＭ）??的缺失可以由ｓＡＣ通路的成份代偿。??ＣａＭ的下游靶标是钙调蛋白激酶（ＣａＭＫ）。各种ＣａＭＫ亚型存在哺乳动物??精子上。抑制ＣａＭＫ，精子的运动能力会降低［４６］。因此ＣａＭ很有可能是通过鞭??毛上一个或多个ＣａＭＫ亚型来实现对精子运动的影响（图３）。??２＿３．３精子运动的能量代谢??２．３．３．１糖的摄取??大家都知道
?２０??１．２．３．２?ＰＣＲ扩增程序??扩增采用降落ＰＣＲ进行，根据图３－１所示设置反应条件［１４７］。??９５ＴＣ９５Ｔ；?９５Ｘ：?９５?Ｘ：?９５］Ｃ?９ＳＴ：??７２Ｘ；?３０ｓ?７２Ｘ：／３〇Ｓ?３０ｓ?３０＊??＾１５０Ｓ?ｗ－?－?＾??３０ｓ?１５ＳＸ？??３０ｓ??ｌ?Ｉ?ｔ?Ｊ?＼?Ｉ?＼?Ｉ?＼???３?ｃｙｃｌｅ?３?ｃｙｃｌｅ?１５?ｃｙｃｌｅ?１５?ｃｙｃｌｅ??图３－１降落ＰＣＲ反应条件??Ｆｉｇ?３－１?Ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｐｒｏｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ?ＰＣＲ??１．２．３．３?ＰＣＲ产物鉴定??将得到的ＰＣＲ扩增产物以０．８％琼脂糖凝胶电泳进行检测。（用１％?ＥＢ染色，??凝胶成像系统对图像进行分析）［１４７］。??１．２．４目的片段胶回收、ＴＡ克隆及鉴定??对于目的片段胶的回收、ＴＡ克隆及鉴定均参考本实验室相关做法。??１．２．４．１目的片段胶回收??根据从北京天根生物公司购买的琼脂糖凝胶回收试剂盒说明书进行胶回收，??操作步骤如下：首先平衡吸附柱（将５００ｐＬ平衡液ＢＬ加入吸附柱中，１２０００ｒｐｍ??离心ｌｍｉｎ，收集管的液体弃掉，把吸附柱放回收集管中），接下来在紫外线下用??刀片把符合预期大小的条带小心切割下来，装入一个干净的１．５ｍＬＥＰ管中，称??取重量（注：〇．ｌｇ对应１〇〇此胶块融化液），然后将３倍胶体积的溶胶液ＰＮ加??２６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠生精细胞凋亡相关基因的分子克隆[J]. 姜宏,李麓芸,卢光琇. 生物化学与生物物理学报. 2001(04)
[2]精子的运动[J]. 岳焕勋,孟珊珊,黄明孔. 男性学杂志. 1993(01)
博士论文
[1]BMP1基因在动物卵泡发生过程中的表达模式及功能的初步研究[D]. 雷小灿.广西大学 2015
硕士论文
[1]水牛、猪GCNF和SF-1基因克隆与表达规律的初步研究[D]. 苏节.广西大学 2013
本文编号：3552304
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：167 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２哺乳动物精子结构示意图??Ａ图：哺乳动物精子尾部中段横截面示意图｜２Ｉ｜；?Ｂ图哺乳动物精子示意
Ｆｉｇ．?３?Ｔｈｅ?ｍａｊｏｒ?ｓｉｇｎａｌ?ｐａｔｈｓ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?ｓｐｅｒｍ?ｍｏｔｉｏｎ??总之至少有两类不同的钙离子通路存在：其中一条是不依赖于ＣａＭ?（例如??ｓＡＣ／ＰＫＡ），而另一条贝丨Ｊ相反（图３）。艮Ｐ钙离子可以在两个地方发挥作用于同一??条通路。因为ｓＡＣ基因的缺失会引起精子活动力丧失，因此ｓＡＣ功能的缺失是??不能由钙调蛋白（ＣａＭ）代偿的。但是也有实验表明，当ＣａＭ被抑制时，精子??运动可以被回复（通过促进ＰＫＡ通路），因此ｓＡＣ这条通路上钙调蛋白（ＣａＭ）??的缺失可以由ｓＡＣ通路的成份代偿。??ＣａＭ的下游靶标是钙调蛋白激酶（ＣａＭＫ）。各种ＣａＭＫ亚型存在哺乳动物??精子上。抑制ＣａＭＫ，精子的运动能力会降低［４６］。因此ＣａＭ很有可能是通过鞭??毛上一个或多个ＣａＭＫ亚型来实现对精子运动的影响（图３）。??２＿３．３精子运动的能量代谢??２．３．３．１糖的摄取??大家都知道
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【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠生精细胞凋亡相关基因的分子克隆[J]. 姜宏,李麓芸,卢光琇. 生物化学与生物物理学报. 2001(04)
[2]精子的运动[J]. 岳焕勋,孟珊珊,黄明孔. 男性学杂志. 1993(01)
博士论文
[1]BMP1基因在动物卵泡发生过程中的表达模式及功能的初步研究[D]. 雷小灿.广西大学 2015
硕士论文
[1]水牛、猪GCNF和SF-1基因克隆与表达规律的初步研究[D]. 苏节.广西大学 2013
本文编号：3552304
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