IFN-τ抗炎机制及其来源的bta-miR-148b/152调控BoLA-I heavy chain表达的研究
发布时间：2021-12-28 22:52
IFN-τ属于Ⅰ型干扰素,只在反刍动物的胚胎滋养层中分泌,作为反刍动物妊娠的识别信号,具备Ⅰ型干扰素功能,还有独特的抗黄体溶解及低细胞毒性特点,已逐渐成为研究热点。它作为一种旁分泌因子与子宫内膜的受体结合,发挥重要的生物学功能,其中包括对Ⅰ类组织相容性复合体分子(MHC-I)的免疫调节。先前的研究已表明在羊上皮细胞中IFN-τ能够促进MHC-I的表达,但IFN-τ调控奶牛Ⅰ类组织相容性复合体分子(BoLA-I)的免疫机制目前尚未见报道。基于IFN-τ的免疫调控报道较少,本试验首先采用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞和建立小鼠急性肺损伤模型探索IFN-τ的抗炎机制;然后通过添加不同浓度的IFN-τ刺激奶牛子宫内膜上皮细胞,寻找IFN-τ的最佳作用浓度;选取最佳浓度的IFN-τ刺激奶牛子宫内膜上皮细胞,采用生物信息学技术预测及分析差异表达的miRNAs与BoLA-I的潜在靶向关系,利用双荧光素酶报告实验验证靶基因,并对其进行功能研究。阐明IFN-τ调节奶牛子宫内膜上皮细胞表达BoLA-I的分子机制,为提升奶牛繁殖力提供理论基础和科学依据。1.IFN-τ的抗炎机制研究IFN-τ属...
【文章来源】： 华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表( ABBREVIATIONS)
第1章 文献综述
前言
1 IFN-τ的生物学研究进展
1.1 IFN-τ是Ⅰ型干扰素
1.2 IFN-τ基因结构及其多态性
1.3 FN-τ在妊娠识别中的作用
1.4 IFN-τ抗病毒活性
1.5 IFN-τ炎性免疫功能
2 Ⅰ类MHC分子功能的研究进展
2.1 MHC-I分子呈递抗原经典作用
2.2 MHC-I分子的非经典作用机制
3 TLR受体在炎性免疫中的研究进展
4 miRNAs研究进展
4.1 miRNA的生物学特性
4.2 miRNA的功能
4.3 miRNA的作用机制
5 Fps-SHP-2通路与BoLA-I分子的关系
6 研究的目的与意义
第2章 IFN-τ的抗炎机制研究
1 引言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 试验主要仪器设备
2.1.2 试验主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1 肺炎模型的建立
2.2.2 肺组织病理切片试验
2.2.3 肺水肿试验
2.2.4 肺组织MPO活力试验
2.2.5 qRT-PCR
2.2.6 ELISA试验
2.2.7 Western blot
3 结果
3.1 IFN-τ对LPS引起肺损伤的影响
3.2 IFN-τ对肺组织干湿比及MPO活力的影响
3.3 IFN-τ对促炎因子表达的影响
3.4 IFN-τ对NF-κB信号通路的影响
3.5 IFN-τ对MAPK信号通路的影响
4 讨论
第3章 IFN-τ调控BoLA-I表达的miRNA文库分析及验证
1 引言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 试验主要仪器设备:参考第二章
2.1.2 主要试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养、鉴定及处理
2.2.2 MTT试验
2.2.3 miRNA和基因表达量分析
2.2.4 蛋白表达量分析:参考第2章Western blot方法
2.2.5 miRNA模拟物和抑制剂的转染试验
2.2.6 双荧光素酶报告基因分析
3 结果
3.1 IFN-τ浓度选择
3.2 细胞鉴定及IFN-τ对BoLA-I heavy chain和miRNA表达的影响
3.3 bta-miR-148b/152靶基因的鉴定
3.4 bta-miR-148b/152与BoLA-I heavy chain呈负相关关系
4 讨论
4.1 IFN-τ对BoLA-I分子表达的影响
4.2 bta-miR-148b/152对BoLA-I heavy chain表达的影响
第4章 bta-miR-148b/152在牛子宫内膜上皮细胞中的靶基因功能研究
1 材料与方法
1.1 试验材料及设备
1.2 试验方法
1.2.1 ELISA、qPCR、Western blot、RNA干扰和免疫荧光技术
2 结果
2.1 LPS对BoLA-I分子表达的影响
2.2 bta-miR-148b/152介导BoLA-I heavy chain影响炎性因子表达
2.3 BoLA-I分子对TLR4及其下游分子的影响
2.4 BoLA-I heavy chain敲除对LPS诱导炎性反应的影响
2.5 BoLA-I heavy chain敲除对TLR4路径的影响
2.6 交联的BoLA-I对LPS诱导炎性反应的影响
3 讨论
3.1 BoLA-I分子对病原菌的影响
3.2 BoLA-I分子对TLR4信号通路的影响
3.3 BoLA-I分子对Fps-SHP-2通路的影响
第5章 全文结论
1 本研究的主要结论
2 本研究不足之处与进一步工作建议
参考文献
附录一 载体构建序列信息
附录二 前期及相关研究
附录三 个人简历
致谢
本文编号：3554886
【文章来源】： 华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表( ABBREVIATIONS)
第1章 文献综述
前言
1 IFN-τ的生物学研究进展
1.1 IFN-τ是Ⅰ型干扰素
1.2 IFN-τ基因结构及其多态性
1.3 FN-τ在妊娠识别中的作用
1.4 IFN-τ抗病毒活性
1.5 IFN-τ炎性免疫功能
2 Ⅰ类MHC分子功能的研究进展
2.1 MHC-I分子呈递抗原经典作用
2.2 MHC-I分子的非经典作用机制
3 TLR受体在炎性免疫中的研究进展
4 miRNAs研究进展
4.1 miRNA的生物学特性
4.2 miRNA的功能
4.3 miRNA的作用机制
5 Fps-SHP-2通路与BoLA-I分子的关系
6 研究的目的与意义
第2章 IFN-τ的抗炎机制研究
1 引言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 试验主要仪器设备
2.1.2 试验主要试剂
2.2 实验方法
2.2.1 肺炎模型的建立
2.2.2 肺组织病理切片试验
2.2.3 肺水肿试验
2.2.4 肺组织MPO活力试验
2.2.5 qRT-PCR
2.2.6 ELISA试验
2.2.7 Western blot
3 结果
3.1 IFN-τ对LPS引起肺损伤的影响
3.2 IFN-τ对肺组织干湿比及MPO活力的影响
3.3 IFN-τ对促炎因子表达的影响
3.4 IFN-τ对NF-κB信号通路的影响
3.5 IFN-τ对MAPK信号通路的影响
4 讨论
第3章 IFN-τ调控BoLA-I表达的miRNA文库分析及验证
1 引言
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 试验主要仪器设备:参考第二章
2.1.2 主要试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养、鉴定及处理
2.2.2 MTT试验
2.2.3 miRNA和基因表达量分析
2.2.4 蛋白表达量分析:参考第2章Western blot方法
2.2.5 miRNA模拟物和抑制剂的转染试验
2.2.6 双荧光素酶报告基因分析
3 结果
3.1 IFN-τ浓度选择
3.2 细胞鉴定及IFN-τ对BoLA-I heavy chain和miRNA表达的影响
3.3 bta-miR-148b/152靶基因的鉴定
3.4 bta-miR-148b/152与BoLA-I heavy chain呈负相关关系
4 讨论
4.1 IFN-τ对BoLA-I分子表达的影响
4.2 bta-miR-148b/152对BoLA-I heavy chain表达的影响
第4章 bta-miR-148b/152在牛子宫内膜上皮细胞中的靶基因功能研究
1 材料与方法
1.1 试验材料及设备
1.2 试验方法
1.2.1 ELISA、qPCR、Western blot、RNA干扰和免疫荧光技术
2 结果
2.1 LPS对BoLA-I分子表达的影响
2.2 bta-miR-148b/152介导BoLA-I heavy chain影响炎性因子表达
2.3 BoLA-I分子对TLR4及其下游分子的影响
2.4 BoLA-I heavy chain敲除对LPS诱导炎性反应的影响
2.5 BoLA-I heavy chain敲除对TLR4路径的影响
2.6 交联的BoLA-I对LPS诱导炎性反应的影响
3 讨论
3.1 BoLA-I分子对病原菌的影响
3.2 BoLA-I分子对TLR4信号通路的影响
3.3 BoLA-I分子对Fps-SHP-2通路的影响
第5章 全文结论
1 本研究的主要结论
2 本研究不足之处与进一步工作建议
参考文献
附录一 载体构建序列信息
附录二 前期及相关研究
附录三 个人简历
致谢
本文编号：3554886
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