鸡朊蛋白对DF-1细胞活性及凋亡通路Wnt/β-catenin的影响
发布时间：2021-12-29 00:58
【目的】利用已建立的鸡朊蛋白过表达和抑制表达DF-1细胞系,通过与正常DF-1细胞系在细胞粘附、侵袭、增殖和凋亡方面的比较,探究鸡朊蛋白对DF-1细胞的影响;检测朊蛋白过表达和抑制表达DF-1细胞与正常DF-1细胞抗凋亡相关基因CK2和Bcl-2的RNA表达量变化,采用CK2抑制剂盐酸米托蒽醌阻断凋亡相关信号转导途径Wnt/β-catenin来阐明朊蛋白过表达以及抑制表达影响DF-1细胞的分子机制,为进一步了解鸡朊蛋白的生理功能和禽源细胞肿瘤发生机制研究提供理论依据。【方法】（1）根据Gen Bank中鸡CK2、Bcl-2和β-actin基因序列各设计一对引物,经过反应条件优化,建立Ch CK2和Ch Bcl-2 m RNA的反转录荧光定量PCR检测方法;将传代稳定后收集的DF-1-Pr P、DF-1和DPs3-5细胞提取其总RNA,以荧光定量RT-PCR法检测3种细胞的CK2和Bcl-2 m RNA表达量差异。（2）在DF-1-Pr P、DF-1和DPs3-5细胞中加入不同浓度盐酸米托蒽醌作用后,以细胞MTT法（噻唑蓝）、流式细胞术、粘附试验和侵袭试验等方法检测朊蛋白与CK2对3种细...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Summary
缩写词英汉对照表
第一章 绪论
1 朊蛋白的构象和朊病毒毒株
1.1 朊蛋白的错误折叠和聚合
1.2 朊病毒的毒性
1.3 PrPC的抗凋亡活性
2 CK2和Bcl-2 基因及相关信号转导通路的研究进展
2.1 Wnt/β-catenin信号转导通路研究进展
2.2 NF-κB信号转导途径研究进展
2.3 CK2的功能
2.3.1 CK2在胚胎发育中的作用
2.3.2 CK2在配子形成过程中的作用
2.3.3 CK2在组织器官中的作用
2.3.4 CK2在癌症中的作用
2.3.5 CK2抑制剂
3 研究目的及意义
4 研究内容和方法
4.1 鸡CK2和Bcl-2 基因mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR检测法建立
4.2 盐酸米托蒽醌对鸡朊蛋白过表达及抑制表达DF-1 细胞增殖和凋亡的影响
第二章 鸡CK2和Bcl-2 基因的SYBR Green Ⅰ 实时定量检测法建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞与菌株
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 方法
1.2.1 细胞总RNA的提取
1.2.2 引物设计
1.2.3 cDNA合成与RT-PCR扩增
1.2.4 标准质粒的构建
1.2.5 标准曲线的绘制
1.2.6 CK2和Bcl-2 基因表达量的荧光定量RT-PCR检测与数据分析
2 结果与分析
2.1 电泳检测PCR扩增产物与阳性质粒的鉴定
2.2 标准曲线的建立
2.3 不同DF-1 细胞CK2和Bcl-2 基因的表达量
3 讨论
第三章 米托蒽醌对鸡朊蛋白过表达和抑制表达DF-1 细胞的影响
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 细胞
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 粘附试验
1.2.3 侵袭试验
1.2.4 细胞增殖和凋亡检测
1.2.4.1 MTT法检测细胞增殖
1.2.4.2 流式细胞仪检测细胞凋亡
1.2.5 不同盐酸米托蒽醌浓度下PrPC的表达量检测
2 结果与分析
2.1 米托蒽醌以剂量依赖方式抑制DF-1 细胞粘附
2.2 米托蒽醌以剂量依赖方式抑制DF-1 细胞侵袭
2.3 米托蒽醌以剂量和时间依赖方式抑制DF-1 细胞增殖
2.4 米托蒽醌以剂量依赖方式促进DF-1 细胞凋亡
2.5 不同米托蒽醌浓度下PrPC基因的表达量分析
3 讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】：
博士论文
[1]鸡朊蛋白参与DF-1细胞增殖粘附的功能研究[D]. 刁小龙.甘肃农业大学 2013
本文编号：3555077
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Summary
缩写词英汉对照表
第一章 绪论
1 朊蛋白的构象和朊病毒毒株
1.1 朊蛋白的错误折叠和聚合
1.2 朊病毒的毒性
1.3 PrPC的抗凋亡活性
2 CK2和Bcl-2 基因及相关信号转导通路的研究进展
2.1 Wnt/β-catenin信号转导通路研究进展
2.2 NF-κB信号转导途径研究进展
2.3 CK2的功能
2.3.1 CK2在胚胎发育中的作用
2.3.2 CK2在配子形成过程中的作用
2.3.3 CK2在组织器官中的作用
2.3.4 CK2在癌症中的作用
2.3.5 CK2抑制剂
3 研究目的及意义
4 研究内容和方法
4.1 鸡CK2和Bcl-2 基因mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR检测法建立
4.2 盐酸米托蒽醌对鸡朊蛋白过表达及抑制表达DF-1 细胞增殖和凋亡的影响
第二章 鸡CK2和Bcl-2 基因的SYBR Green Ⅰ 实时定量检测法建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞与菌株
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 方法
1.2.1 细胞总RNA的提取
1.2.2 引物设计
1.2.3 cDNA合成与RT-PCR扩增
1.2.4 标准质粒的构建
1.2.5 标准曲线的绘制
1.2.6 CK2和Bcl-2 基因表达量的荧光定量RT-PCR检测与数据分析
2 结果与分析
2.1 电泳检测PCR扩增产物与阳性质粒的鉴定
2.2 标准曲线的建立
2.3 不同DF-1 细胞CK2和Bcl-2 基因的表达量
3 讨论
第三章 米托蒽醌对鸡朊蛋白过表达和抑制表达DF-1 细胞的影响
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 细胞
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
1.2.2 粘附试验
1.2.3 侵袭试验
1.2.4 细胞增殖和凋亡检测
1.2.4.1 MTT法检测细胞增殖
1.2.4.2 流式细胞仪检测细胞凋亡
1.2.5 不同盐酸米托蒽醌浓度下PrPC的表达量检测
2 结果与分析
2.1 米托蒽醌以剂量依赖方式抑制DF-1 细胞粘附
2.2 米托蒽醌以剂量依赖方式抑制DF-1 细胞侵袭
2.3 米托蒽醌以剂量和时间依赖方式抑制DF-1 细胞增殖
2.4 米托蒽醌以剂量依赖方式促进DF-1 细胞凋亡
2.5 不同米托蒽醌浓度下PrPC基因的表达量分析
3 讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介
【参考文献】：
博士论文
[1]鸡朊蛋白参与DF-1细胞增殖粘附的功能研究[D]. 刁小龙.甘肃农业大学 2013
本文编号：3555077
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3555077.html
