猪链球菌2型表面蛋白Fhb与补体系统组分蛋白相互作用分子机制的研究
发布时间：2021-12-29 07:29
猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2，SS2)是近年来新发的一种重要的人兽共患病病原体，人经伤口感染猪链球菌后主要引起脑膜炎、心内膜炎、败血症和链球菌中毒性休克综合征（STSS）等症状。目前，对于猪链球菌2型致病机制，尤其是猪链球菌2型在人血中如何逃逸补体介导的吞噬杀伤研究还不是很清楚。 补体作为天然免疫防御中的一个重要成分，是保护宿主免受外来病原体入侵的一个有力武器。补体激活是一种高度有序的级联反应，宿主体内补体激活有三条途径：经典途径；甘露糖结合凝集素途径；替代途径。这三条途径都形成C3转化酶，裂解C3产生活性补体成分C3b，大量的C3b分子与病原体结合是补体活化中的重要事件。大部分能够引起侵袭性疾病的病原菌都得益于通过直接抑制C3b或招募H因子（human Factor H，hFH）来抑制其表面C3b的沉积和功能，进而抑制补体系统的活化和补体受体介导的吞噬。 实验室前期研究发现猪链球菌2型毒力因子表面蛋白Fhb（factor H-bindingprotein），能够招募人血清中的补体负调节子hFH，抑制补体替代途径的活化，从而增强猪链球菌在血中存...
【文章来源】： 安徽医科大学安徽省
【文章页数】：79 页
【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
1 前言
1.1 猪链球菌概述
1.2 猪链球菌 2 型毒力因子
1.2.1 荚膜多糖（CPS）
1.2.2 溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）
1.2.3 溶血素（SLY）
1.2.4 腺苷合成酶 （Ssads）
1.2.5 H 因子结合蛋白（Fhb）
1.3 本研究的目的及意义
第一部分 与补体组分蛋白相互作用的 Fhb 蛋白结构域的确定
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 载体和菌株
1.1.2 主要试剂和材料
1.1.3 主要仪器和设备
1.2 实验方法
1.2.1 引物设计
1.2.2 截短表达片段和敲除结构域片段重组质粒的构建
1.2.3 重组菌的诱导表达
1.2.4 重组蛋白的表达纯化
1.2.5 正常健康人血清的制备
1.2.6 生物素标记蛋白
1.2.7 ELISA 检测 Fhb 截短片段和敲除结构域片段与补体 蛋白 hFH，C3b，C3d 的结合
1.2.8 配体印迹验证 Fhb 截短片段与补体蛋白 hFH，C3b， C3d 的结合
1.2.9 生物膜干涉（Biolayer Interferometry，BLI）分析重组 Fhb 截短片段与补体蛋白 hFH，C3b，C3d 的结合
2 结果
2.1 重组 Fhb 截短表达片段ⅠⅥ质粒的构建和鉴定
2.2 Fhb 截短片段ⅠⅥ重组蛋白的表达纯化
2.3 Fhb 截短表达片段Ⅲ*重组质粒的构建和鉴定
2.4 重组蛋白 His-Fhb-Ⅲ*的表达和纯化
2.5 Fhb 敲除结构域蛋白重组质粒的构建和鉴定
2.6 Fhb 敲除结构域重组蛋白的表达纯化
2.7 重组 Fhb 截短结构域 His-Fhb-Ⅲ*与补体蛋白 hFH，C3b 和 C3d 的结合
2.7.1 Fhb 截短结构域 His-Fhb-Ⅲ*特异性结合补体组分蛋白 hFH
2.7.2 重组 Fhb 截短结构域 His-Fhb-Ⅲ*特异性结合补体组分蛋白 C3b 和 C3d
3 讨论
第二部分 表面蛋白 Fhb 功能结构域Ⅲ*参与猪链球菌抑制补体激活的作用
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验菌株
1.1.2 实验材料和试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 实验方法
1.2.1 CΔSsfhb-3 基因缺失互补株的构建
1.2.2 Fhb 蛋白在猪链球菌中的定位
1.2.3 上清蛋白 Fhb 对猪链球菌表面 C3b/iC3b 沉积的影响
1.2.4 重组蛋白 Fhb 结构Ⅲ*对猪链球菌表面 C3b/iC3b 沉积的影响
2 结果
2.1 Ssfhb-3 上下游片段的扩增及与 pEASYTM-Blunt Zero 载体的连接和鉴定
2.2 Ssfhb-3 基因与 pAT18 载体的连接和鉴定
2.3 缺失互补株 CΔSsfhb-3 的鉴定
2.4 Fhb 蛋白在猪链球菌中的定位
2.5 上清蛋白 Fhb 对猪链球菌表面 C3b/iC3b 沉积的影响
2.6 Fhb 功能结构域Ⅲ*能够抑制猪链球菌表面 C3b/iC3b 的沉积
3 讨论
结论
参考文献
附录Ⅰ
附录Ⅱ
致谢
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达 [J]. 徐淑菲,何孔旺,陆承平. 中国人兽共患病杂志. 2004(11)
[2]猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白的黏附作用 [J]. 曾巧英,陆承平. 南京农业大学学报. 2002(04)
硕士论文
[1]2型猪链球菌表面蛋白Hp0272参与逃逸宿主天然免疫的分子机制研究[D]. 甘淑珍.华中农业大学. 2012
本文编号：3555674
【文章来源】： 安徽医科大学安徽省
【文章页数】：79 页
【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
1 前言
1.1 猪链球菌概述
1.2 猪链球菌 2 型毒力因子
1.2.1 荚膜多糖（CPS）
1.2.2 溶菌酶释放蛋白（MRP）和胞外因子（EF）
1.2.3 溶血素（SLY）
1.2.4 腺苷合成酶 （Ssads）
1.2.5 H 因子结合蛋白（Fhb）
1.3 本研究的目的及意义
第一部分 与补体组分蛋白相互作用的 Fhb 蛋白结构域的确定
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 载体和菌株
1.1.2 主要试剂和材料
1.1.3 主要仪器和设备
1.2 实验方法
1.2.1 引物设计
1.2.2 截短表达片段和敲除结构域片段重组质粒的构建
1.2.3 重组菌的诱导表达
1.2.4 重组蛋白的表达纯化
1.2.5 正常健康人血清的制备
1.2.6 生物素标记蛋白
1.2.7 ELISA 检测 Fhb 截短片段和敲除结构域片段与补体 蛋白 hFH，C3b，C3d 的结合
1.2.8 配体印迹验证 Fhb 截短片段与补体蛋白 hFH，C3b， C3d 的结合
1.2.9 生物膜干涉（Biolayer Interferometry，BLI）分析重组 Fhb 截短片段与补体蛋白 hFH，C3b，C3d 的结合
2 结果
2.1 重组 Fhb 截短表达片段ⅠⅥ质粒的构建和鉴定
2.2 Fhb 截短片段ⅠⅥ重组蛋白的表达纯化
2.3 Fhb 截短表达片段Ⅲ*重组质粒的构建和鉴定
2.4 重组蛋白 His-Fhb-Ⅲ*的表达和纯化
2.5 Fhb 敲除结构域蛋白重组质粒的构建和鉴定
2.6 Fhb 敲除结构域重组蛋白的表达纯化
2.7 重组 Fhb 截短结构域 His-Fhb-Ⅲ*与补体蛋白 hFH，C3b 和 C3d 的结合
2.7.1 Fhb 截短结构域 His-Fhb-Ⅲ*特异性结合补体组分蛋白 hFH
2.7.2 重组 Fhb 截短结构域 His-Fhb-Ⅲ*特异性结合补体组分蛋白 C3b 和 C3d
3 讨论
第二部分 表面蛋白 Fhb 功能结构域Ⅲ*参与猪链球菌抑制补体激活的作用
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验菌株
1.1.2 实验材料和试剂
1.1.3 主要仪器
1.2 实验方法
1.2.1 CΔSsfhb-3 基因缺失互补株的构建
1.2.2 Fhb 蛋白在猪链球菌中的定位
1.2.3 上清蛋白 Fhb 对猪链球菌表面 C3b/iC3b 沉积的影响
1.2.4 重组蛋白 Fhb 结构Ⅲ*对猪链球菌表面 C3b/iC3b 沉积的影响
2 结果
2.1 Ssfhb-3 上下游片段的扩增及与 pEASYTM-Blunt Zero 载体的连接和鉴定
2.2 Ssfhb-3 基因与 pAT18 载体的连接和鉴定
2.3 缺失互补株 CΔSsfhb-3 的鉴定
2.4 Fhb 蛋白在猪链球菌中的定位
2.5 上清蛋白 Fhb 对猪链球菌表面 C3b/iC3b 沉积的影响
2.6 Fhb 功能结构域Ⅲ*能够抑制猪链球菌表面 C3b/iC3b 的沉积
3 讨论
结论
参考文献
附录Ⅰ
附录Ⅱ
致谢
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达 [J]. 徐淑菲,何孔旺,陆承平. 中国人兽共患病杂志. 2004(11)
[2]猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白的黏附作用 [J]. 曾巧英,陆承平. 南京农业大学学报. 2002(04)
硕士论文
[1]2型猪链球菌表面蛋白Hp0272参与逃逸宿主天然免疫的分子机制研究[D]. 甘淑珍.华中农业大学. 2012
本文编号：3555674
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3555674.html
