布鲁氏菌L7/L12-Omp16融合基因不同亚单位疫苗的构建及其免疫原性分析

发布时间：2021-12-30 03:24

　　布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌（Brucella.app）引起的人畜共患病,流行较广,危害巨大,主要造成波状热和慢性感染,引起流产和不孕不育,严重危害了人类健康和畜牧业发展。目前研究较多的布鲁氏菌疫苗主要有灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗,但灭活疫苗引起免疫效果差,减毒活疫苗又存在接种后出现强烈副反应、免疫与感染的难以鉴别,以及个别情况下出现菌毒回升等缺点,因此寻找有效的布鲁氏菌亚单位疫苗已成为研究重点。本研究通过PCR扩增得到L7/L12和Omp16基因片段,构建了原核表达质粒pET-28a-L7/L12和pET-28a-Omp16,经IPTG诱导表达后得到rL7/L12蛋白和rOmp16蛋白。Overlap PCR扩增L7/L12-Omp16融合基因片段,构建真核表达质粒pVAX1-L7/L12-Omp16,转染293T细胞后进行间接免疫荧光检测,结果显示,该DNA疫苗可在真核细胞中高效表达。同时,构建pMV306-L7/L12-Omp16重组质粒,电转化至BCG感受态细胞制备重组BCG载体疫苗,Western Blot验证结果表明,L7/L12-Omp16融合蛋... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Omp16基因的PCR扩增M:DL2000DNAMaker

重组质粒pET-28a-L7/L12PCR及双酶切鉴定

.3 L7/L12 和 Omp16 蛋白的表达及纯化将重组菌扩大培养后 IPTG 诱导 3h，收集菌体超声破碎，菌体裂解液的上沉淀进行 15% SDS-PAGE 分析，可见重组 L7/L12 蛋白在大肠杆菌中高水平，相对分子质量约为 17 ku，且以可溶和包涵体两种形式存在见图 1.5。重p16 蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在，相对分子质量约为 16 ku，.3 重组质粒 pET-28a-L7/L12 PCR 及双酶切鉴定NA 分子质量标准; 1. pET-28a-L7/L12 的双酶切产物; 2. PCR 扩增产物；g.2 PCR and restriction enzyme digestionanalysis of the recombinant plasmidpET-28a-L7/L12. DL5000 DNA Marker; 1. Product fromET-28a-L7/L12 digested with restrictionenzymes; 2.PCR Product图 1.4 重组质粒 pET-28a-Omp16 PCR 切鉴定M. DNA 分子质量标准; 1. pET-28a-Om双酶切产物; 2. PCR 扩增产物；Fig.2 PCR and restriction enzyme digeanalysis of the recombinant plasmipET-28a-Omp16M. DL5000 DNA Marker; 1. Product fpET-28a-Omp16 digested with restricenzymes; 2.PCR Product


本文编号：3557380