巨型艾美耳球虫偏菱形样蛋白EmRP免疫原性分析

发布时间：2021-12-30 15:58

　　在前期研究中,从巨型艾美耳球虫（Eimeria maxima）cDNA文库中筛选到了免疫保护性抗原偏菱形样蛋白EmRP,本研究为揭示该抗原的免疫保护机理,进一步检测了其免疫原性。以E.maxima卵囊cDNA为模板,用RT-PCR技术扩增EmRP,并构建真核表达质粒pVAX1-EmRP,将其经腿部肌肉注射2周龄的雏鸡,3周龄加强免疫。分别于首次免疫后和加强免疫后1周,采集血清,用ELISA方法检测血清特异性IgG水平,用荧光定量PCR方法（qPCR）检测细胞因子水平,用流式细胞术检测CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞的比例,分析EmRP诱导的免疫反应。序列分析表明,EmRP含有偏菱形样蛋白超家族成员保守区域,为非跨膜蛋白,分子量约为28.4 kD。真核表达质粒pVAX1-EmRP免疫鸡后,与对照组相比,鸡体IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17等细胞因子转录水平显著提升;CD8⁺和CD4⁺ T细胞比例显著提高,而血清特异性IgG水平与对照组差异不显著。结果表明,EmRP诱导的免疫保护作用主... 

【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

琼脂糖凝胶电泳检测EmRP扩增产物

重组质粒pVAX1-EmRP的酶切鉴定

如表2所示,流式细胞术分析鸡脾脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例在首次免疫后和加强免疫后的变化,发现与对照组pVAX1组和PBS组相比,两次免疫后试验组CD4+T细胞和CD8+T细胞比例都显著升高(P<0.05)。表2 免疫后鸡脾脏淋巴细胞中T细胞亚类的百分比 % 表面标记物 组别 首次免疫 加强免疫 CD4+/CD3+ PBS 4.28±1.97b 13.44±1.27b pVAX1 5.62±1.47b 14.12±0.37b EmRP 17.59±9.09a 24.02±4.00a CD8+/CD3+ PBS 14.58±2.01b 22.00±0.79b pVAX1 16.11±0.51b 23.00±0.79b EmRP 23.42±5.33a 32.22±1.11a 注:同一列中,肩标含不同字母表示差异显著性(P<0.05),含相同字母表示差异不显著性(P>0.05)


本文编号：3558528