感染金黄色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺组织及外周血中TLRs和CK的表达
发布时间：2021-12-31 19:05
本实验以小尾寒羊为实验动物研究由金黄色葡萄球菌引起的乳房炎,探究TLRs和CK的表达及与乳房炎之间的关系。利用实时荧光定量PCR方法（FQ RT-PCR）检测TLRs基因在感染金黄色葡萄球菌后12 h、24 h、36 h、48 h和72 h的乳腺组织及外周血白细胞中的相对表达量;用Western-blot方法检测感染金黄色葡萄球菌12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后,TLRs蛋白在小尾寒羊乳腺组织中的表达情况;用ELISA法检测血清中TNF-α、IFN-α、IL-1β、IL-16的浓度。结果表明:TLRs在感染后的乳腺组织及外周血白细胞中差异表达。感染后的外周血白细胞中,TLR8未表达,TLR2在12 h的表达量显著升高;TLR6、TLR7在48 h的表达量显著升高;TLR1、TLR3、TLR4的表达量均低于对照组;TLR9在12 h和24 h以及TLR5、10在12 h的表达量无差异,其余时间段的表达量低于对照组。感染后的乳腺组织中,除TLR8和TLR9无表达外,其它TLRs均表达。TLR2在各时段的表达量均高于对照组,在12 h、24 h和36 h的表达量显著升高;T...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外周血白细胞中TLR1~10基因的PCR检测Fig1ThePCRdetectionofTLR1~10geneinPeripheralbloodleukocyte
图 2-1 外周血白细胞中 TLR1~10 基因的 PCR 检测Fig 1 The PCR detection of TLR1~10 gene in Peripheral blood leDL750 分子质量标准；1~10 分别代表的是 TLR1~TLR10 的扩增产物DL750 DNALadder;1~10 respective the products amplified of TLR1 to TLR10 TLR1~10 基因进行 PCR 扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，可段大小一致的电泳条带。由图 2-1 可以看出感染金黄色葡萄球菌后小细胞中除 TLR8 无条带，其余 TLRs 均出现强弱不同的条带。
甘肃农业大学 2018 届硕士毕业生2.2 TLRs 的溶解曲线荧光定量PCR常用于基因定量和准确定量目的基因的表达，不仅可以实时检测的产物量，还可以通过溶解曲线识别扩增产物的单一性和引物二聚体。利用 ABI荧光定量 PCR 仪分别将 TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、T及β-actin 进行扩增，扩增 40 个循环后，溶解曲线有单一峰，目的性产物的特异性较（如图 2-3 所示）
【参考文献】：
期刊论文
[1]金黄色葡萄球菌对小尾寒羊乳腺组织TLR2表达的影响[J]. 马小军,陈富强,张小丽,李发弟,唐然,张晨,宋晓育,张欣. 华北农学报. 2016(05)
[2]甘肃省定西市安定区舍饲小尾寒羊乳房炎流行现状与对策[J]. 赵继红. 北京农业. 2015(29)
[3]慢性阻塞性肺疾病血浆IL-16、TNF-α和FIB的表达[J]. 张文辉,陈永凤,左丽娜,孙思,顾翔. 临床肺科杂志. 2014(12)
[4]牦牛TLR6基因的克隆、序列分析及其表达分布研究[J]. 林宝山,兰道亮,黄偲,陈亚冰,张雁,王英,李键. 东北农业大学学报. 2014(07)
[5]支气管哮喘患儿IL-16的测定及临床诊断意义[J]. 刘兵. 中国实验诊断学. 2013(07)
[6]p38MAPK信号途径抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中TNF-α表达的调控作用[J]. 江涛,方茂勇. 肝胆外科杂志. 2013(03)
[7]乳腺癌组织TLR4蛋白表达及与细胞凋亡和增殖的关系[J]. 吕宝军,张红雨,王晓鸿,苟新敏. 中华普通外科学文献(电子版). 2011(03)
[8]Toll样受体介导的信号转导通路及其调控分子的研究进展[J]. 曾爽,何小兵,陈国华,房永祥,贾怀杰,景志忠. 中国兽医科学. 2011(04)
[9]IL-1β和TNF-α表达量与新生儿缺血缺氧性脑病脑损伤程度的相关性[J]. 阎雯,黄妮娜,贾小芳,杨雪峰. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(07)
[10]复发性单纯疱疹患儿外周血Toll样受体和细胞因子的变化[J]. 汤建萍,孙磊. 中国当代儿科杂志. 2009(09)
博士论文
[1]TOLL样受体4/核转录因子-κB信号通路在脂多糖诱导奶牛乳腺炎症反应中的作用[D]. 吴洁.南京农业大学 2016
硕士论文
[1]TLR2、TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺组织中表达的研究[D]. 陈富强.甘肃农业大学 2016
[2]游泳运动对小鼠脾脏TLR2、TLR4诱导表达作用的实验研究[D]. 吴嫔赟.苏州大学 2011
[3]TLR2基因多态性及其与奶牛乳房炎的相关分析[D]. 刘利.吉林大学 2009
[4]耐多药结核分枝杆菌感染巨噬细胞对Toll样受体2、4的调节作用[D]. 任卫聪.北京市结核病胸部肿瘤研究所 2009
[5]上海地区奶牛乳房炎主要致病菌分析及基因治疗初探[D]. 易明梅.上海交通大学 2008
本文编号：3560806
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外周血白细胞中TLR1~10基因的PCR检测Fig1ThePCRdetectionofTLR1~10geneinPeripheralbloodleukocyte
图 2-1 外周血白细胞中 TLR1~10 基因的 PCR 检测Fig 1 The PCR detection of TLR1~10 gene in Peripheral blood leDL750 分子质量标准；1~10 分别代表的是 TLR1~TLR10 的扩增产物DL750 DNALadder;1~10 respective the products amplified of TLR1 to TLR10 TLR1~10 基因进行 PCR 扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，可段大小一致的电泳条带。由图 2-1 可以看出感染金黄色葡萄球菌后小细胞中除 TLR8 无条带，其余 TLRs 均出现强弱不同的条带。
甘肃农业大学 2018 届硕士毕业生2.2 TLRs 的溶解曲线荧光定量PCR常用于基因定量和准确定量目的基因的表达，不仅可以实时检测的产物量，还可以通过溶解曲线识别扩增产物的单一性和引物二聚体。利用 ABI荧光定量 PCR 仪分别将 TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9、T及β-actin 进行扩增，扩增 40 个循环后，溶解曲线有单一峰，目的性产物的特异性较（如图 2-3 所示）
【参考文献】：
期刊论文
[1]金黄色葡萄球菌对小尾寒羊乳腺组织TLR2表达的影响[J]. 马小军,陈富强,张小丽,李发弟,唐然,张晨,宋晓育,张欣. 华北农学报. 2016(05)
[2]甘肃省定西市安定区舍饲小尾寒羊乳房炎流行现状与对策[J]. 赵继红. 北京农业. 2015(29)
[3]慢性阻塞性肺疾病血浆IL-16、TNF-α和FIB的表达[J]. 张文辉,陈永凤,左丽娜,孙思,顾翔. 临床肺科杂志. 2014(12)
[4]牦牛TLR6基因的克隆、序列分析及其表达分布研究[J]. 林宝山,兰道亮,黄偲,陈亚冰,张雁,王英,李键. 东北农业大学学报. 2014(07)
[5]支气管哮喘患儿IL-16的测定及临床诊断意义[J]. 刘兵. 中国实验诊断学. 2013(07)
[6]p38MAPK信号途径抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中TNF-α表达的调控作用[J]. 江涛,方茂勇. 肝胆外科杂志. 2013(03)
[7]乳腺癌组织TLR4蛋白表达及与细胞凋亡和增殖的关系[J]. 吕宝军,张红雨,王晓鸿,苟新敏. 中华普通外科学文献(电子版). 2011(03)
[8]Toll样受体介导的信号转导通路及其调控分子的研究进展[J]. 曾爽,何小兵,陈国华,房永祥,贾怀杰,景志忠. 中国兽医科学. 2011(04)
[9]IL-1β和TNF-α表达量与新生儿缺血缺氧性脑病脑损伤程度的相关性[J]. 阎雯,黄妮娜,贾小芳,杨雪峰. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(07)
[10]复发性单纯疱疹患儿外周血Toll样受体和细胞因子的变化[J]. 汤建萍,孙磊. 中国当代儿科杂志. 2009(09)
博士论文
[1]TOLL样受体4/核转录因子-κB信号通路在脂多糖诱导奶牛乳腺炎症反应中的作用[D]. 吴洁.南京农业大学 2016
硕士论文
[1]TLR2、TLR4基因在小尾寒羊乳房炎乳腺组织中表达的研究[D]. 陈富强.甘肃农业大学 2016
[2]游泳运动对小鼠脾脏TLR2、TLR4诱导表达作用的实验研究[D]. 吴嫔赟.苏州大学 2011
[3]TLR2基因多态性及其与奶牛乳房炎的相关分析[D]. 刘利.吉林大学 2009
[4]耐多药结核分枝杆菌感染巨噬细胞对Toll样受体2、4的调节作用[D]. 任卫聪.北京市结核病胸部肿瘤研究所 2009
[5]上海地区奶牛乳房炎主要致病菌分析及基因治疗初探[D]. 易明梅.上海交通大学 2008
本文编号：3560806
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