非洲猪瘟病毒p30单克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2022-01-03 06:50

　　p30蛋白是非洲猪瘟病毒（ASFV）的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Rosetta后,经IPTG诱导表达和镍柱纯化;将纯化后的重组p30蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合和间接ELISA方法,筛选出了2株能够稳定分泌抗p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,并通过制备腹水的方法获得单克隆抗体;最后经Western-blot和IFA试验鉴定,其均能与ASFV感染细胞发生特异性反应。本研究为ASFV感染的诊断和致病机制研究提供了重要材料。 

【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(08)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

p30重组蛋白的SDS-PAGE鉴定

成功表达在包涵体的p30蛋白，用结合缓冲液溶解过夜后，将表达产物通过AKTA蛋白纯化系统结合到带有His标签的镍柱上，洗脱后获得较高纯度和浓度的目的蛋白（图3）。2.3 单克隆抗体的亚型鉴定

ASFV感染PAM细胞24 h后，通过间接免疫荧光试验来验证2株单克隆抗体的特异性，结果（图6）显示，在有ASFV感染的细胞组中，2株单抗均可与感染ASFV的细胞产生特异性的荧光，且荧光基本分布在细胞质中，而未接毒组的细胞未发现特异性荧光。图5 单克隆抗体的Western-blot鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3565788