填饲对鹅肝胆固醇合成相关基因表达的影响

发布时间：2022-01-05 02:38

　　鹅肥肝是世界三大美食之一。填饲是获得鹅肥肝的重要技术手段。经过填饲后,鹅肝中含有大量对人体健康有益的不饱和脂肪酸、卵磷脂、微量元素等,具有较高的经济价值。以往的研究多关注于肝脏脂肪酸的研究,而关于胆固醇方面的文献报道甚少,也没有关于填饲对鹅肝脏胆固醇含量影响的报道。HMGCS1基因参与调控HMG-CoA合成酶的生成,该酶是肝脏胆固醇生物合成中的关键酶,其功能是将乙酰CoA和乙酰乙酰CoA缩合为HMG-CoA。该基因与胆固醇的合成密切相关。本试验旨在获得鹅HMGCS1基因的cDNA序列,观察该基因与填饲鹅肝脏生成胆固醇的相关性。运用RACE方法扩增目的基因的cDNA序列,进行生物信息学分析。对填饲鹅进行形态学观察和组织切片观察,同时对朗德鹅的体重、肝重、肝重指数等屠宰性状进行统计分析。并选用胆固醇试剂盒测定鹅肝中胆固醇的含量。在分子生物技术方面,利用荧光定量PCR技术检测并分析HMGCS1基因在各组织中mRNA的表达,同时比较填饲后各组织HMGCS1基因表达的变化。在体外试验方面,通过对半原位灌注法的改进,分离培养鹅肝细胞,观察细胞动态变化,探究各类脂肪酸、葡萄糖和胰岛素对鹅肝细胞脂肪沉... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文献综述
    1.1 胆固醇代谢调控研究进展
        1.1.1 胆固醇代谢
        1.1.2 HMGCS1基因的研究进展
    1.2 RACE和基因克隆
        1.2.1 RACE概述
        1.2.2 原理及方法
    1.3 动物肝细胞培养的研究进展
        1.3.1 原代肝细胞培养技术
        1.3.2 动物肝细胞研究进展
    1.4 RNA干扰技术
        1.4.1 RNA干扰技术的发展
        1.4.2 siRNA结构与设计
第二章 HMGCS1基因cDNA克隆及生物信息学分析
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 鹅肝组织总RNA琼脂糖凝胶电泳检测
        2.3.2 鹅HMGCS1基因RT-PCR结果
        2.3.3 鹅HMGCS1基因cDNA序列
    2.4 讨论
第三章 HMGCS1基因的组织特异性表达
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 试验动物
        3.2.2 试剂和耗材
        3.2.3 试验方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 总RNA粗提结果验证
        3.3.2 扩增效率检测
        3.3.3 HMGCS1基因在各组织中的分布
    3.4 讨论
第四章 胆固醇在肝脏中的含量测定
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 试验动物
        4.2.2 试剂和耗材
        4.2.3 主要仪器
        4.2.4 试验方法
        4.2.5 数据统计
    4.3 结果与分析
        4.3.1 肝脏组织形态学观察
        4.3.2 肝脏组织切片观察
        4.3.3 胆固醇含量测定结果
    4.4 讨论
第五章 脂肪酸、胰岛素及葡萄糖对鹅肝细胞中脂肪酸沉积及HMGCS1基因表达的影响
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 试验动物
        5.2.2 试剂与材料
        5.2.3 方法
    5.3 结果与分析
        5.3.1 鹅原代肝细胞形态观察
        5.3.2 油红O染色后肝细胞形态观察
        5.3.3 脂肪酸、葡萄糖以及胰岛素处理肝细胞后Neilred染色及HMGCS1基因的表达
    5.4 讨论
全文总结和展望
参考文献
致谢
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本文编号：3569558