猪不同生长阶段不同组织线粒体DNA（mtDNA）拷贝数变化

发布时间：2022-01-05 15:25

　　线粒体DNA（mitochondrial DNA）是动物细胞中核外唯一遗传物质,其拷贝数是衡量细胞中线粒体数目的重要标志。根据组织细胞的能量需求及耗氧量,在哺乳动物体细胞中数目为～1,000-10,000不等拷贝数。在生长发育过程中,组织中mtDNA拷贝数也有不同的变化趋势,以满足组织的能量代谢需求。mtDNA编码37个基因,包括2个rRNA,13个蛋白和22个tRNA。线粒体是半自主细胞器,因为构成线粒体的其他蛋白以及参与mtDNA复制和转录的相关酶类及分子均是由核基因组编码,因此线粒体的遗传体系是依赖核基因组,其中TWINKLE是线粒体中唯一的DNA解旋酶,参与mtDNA复制与转录过程。此外,大量研究发现在哺乳动物中,伴随着生长发育过程,mtDNA会出现长片段缺失变异,导致细胞组织功能异常。研究显示,线粒体中存在转录前调控,发现线粒体DNA序列中存在多个CpG位点及甲基转移酶,推测线粒体基因转录受到了甲基化的调控。对所有试验样品mtDNA是否存在片段缺失进行检测,本试验设计了5对引物对mtDNA全序列进行long PCR扩增,片段长度为1.5kb～5.5kb,凝胶电泳后,未在样品中... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 文献综述
    1.1 线粒体(mitochondrion)
    1.2 线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)
    1.3 mtDNA的复制与转录
    1.4 mtDNA拷贝数(mtDNA copy number)
    1.5 mtDNA甲基化
    1.6 Long PCR
    1.7 实时荧光定量PCR(Q-PCR)
2. 研究目的及意义
3. 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 试验动物
        3.1.2 样品采集
        3.1.3 主要仪器设备
        3.1.4 实验所需试剂(盒)
    3.2 试验方法
        3.2.1 DNA提取及检测
        3.2.2 总RNA提取及检测
        3.2.3 PCR引物设计及合成
        3.2.4 Long PCR
        3.2.5 定量各样品中mtDNA拷贝数
        3.2.6 mRNA反转录
        3.2.7 定量各样品中线粒体基因及核基因相关基因表达
        3.2.8 mtDNA甲基化检测
        3.2.9 数据分析
4. 试验结果
    4.1 各扩增片段扩增效果无差异
    4.2 样品mtDNA不存在大片段缺失
    4.3 组织中mtDNA拷贝数存在差异
    4.4 TWINKLE基因表达量与mtDNA拷贝数有显著线性关系
    4.5 线粒体基因表达量与mtDNA拷贝数存在显著线性关系
    4.6 mtDNA D-loop区域存在甲基化
5. 讨论
    5.1 mtDNA扩增片段选择分析
    5.2 mtDNA拷贝数的时空差异性分析
    5.3 核基因及线粒体基因与mtDNA拷贝数关联性分析
    5.4 mtDNA D-loop区域甲基化分析
6. 结论
7. 参考文献
致谢
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本文编号：3570595