猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其M蛋白原核表达

发布时间：2022-01-06 01:58

　　猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起哺乳仔猪腹泻、呕吐、脱水和高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病,该病对全世界的养猪业造成了严重的经济损失。本研究对从遂宁地区的猪场采集的PED病料分离,然后对分离出的PEDV的M基因进行克隆、序列分析、原核表达载体构建、原核表达、多克隆抗体制备及其抗原性鉴定,为PEDV的进一步研究提供参考。1.猪流行性腹泻病毒的分离和鉴定本研究通过对采集的病料用PK-15传代细胞进行病毒的分离,通过琼脂扩散和动物回归试验鉴定病毒,结果表明四川遂宁地区此次仔猪腹泻是由PEDV引起的,该病毒能使细胞产生变亮、变圆的病变,待病毒适应细胞之后会有轻微的拉网病变；纯化后的病毒经RT-PCR检测、琼扩试验、动物回归试验鉴定为PEDV病毒,并命名为PEDV四川株SC-405,毒株的TCID50为10-2.86/0.1mL。2.猪流行性腹泻病毒M基因的克隆及序列分析本研究由已知的PEDV标准毒株CV777基因序列,采用Primer5.... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
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第一章 文献综述
    1 猪流行性腹泻病毒的病原学特性
        1.1 病原学
        1.2 PEDV的培养
        1.3 基因组结构
        1.4 流行病学
        1.5 诊断与防制
        1.6 实验研究的理论意义
第二章 病毒的分离和鉴定
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 猪外源病毒(RT-)PCR检测
        2.2 病毒的初步分离
        2.3 分离病毒的纯化后检测
        2.4 琼扩试验
        2.5 病毒TCID_(50)
        2.6 动物回归试验
    3 讨论
        3.1 实验室诊断
        3.2 病毒初步分离
        3.3 病毒纯化
        3.4 病毒鉴定
第三章 PEDV M蛋白基因克隆和序列生物信息学分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 目的基因的PCR扩增
        2.2 产物胶回收效果
        2.3 克隆质粒的PCR鉴定
        2.4 克隆质粒提取和双酶切鉴定
        2.5 测序结果
        2.6 序列生物信息学分析
    3 讨论
        3.1 克隆序列分析
        3.2 系统进化树分析
        3.3 PEDV-SC-405M基因编码蛋白的B细胞表位分析
第四章 M蛋白的原核表达及间接ELISA方法的初步建立
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 原核表达质粒鉴定
        2.2 原核表达产物条件优化
        2.3 蛋白纯化
        2.4 Western blot鉴定
        2.5 琼脂扩散鉴定免疫原性
    3 讨论
        3.1 基因原核表达
        3.2 诱导表达的条件优化
        3.3 重组蛋白抗原性检测
第五章 结论
参考文献
致谢
研究生阶段发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 张坤,何启盖.  畜牧兽医学报. 2010(08)
[2]猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展[J]. 孙东波,冯力,时洪艳,陈建飞.  动物医学进展. 2006(10)
[3]猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展[J]. 李建强,柳纪省,胡永浩,程杰,兰喜,殷相平,李宝玉,李志勇,杨彬,马友记.  动物医学进展. 2006(02)
[4]早期断奶仔猪腹泻病药物防治试验[J]. 赵青,钟土木,毛方军,孙渡江.  浙江农业学报. 2005(02)
[5]黑龙江省规模化养猪场猪流行性腹泻诊断和病毒分离鉴定[J]. 孙光,贲百灵,王翠玲,孙广力,李书华,魏萍,郭昭林,杨本.  畜牧兽医科技信息. 2004(06)
[6]RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒方法的建立[J]. 吴国平,尹燕博,孙淑芳,郭福生,何后军,龚振华.  中国兽医杂志. 2003(03)
[7]PEDV膜蛋白基因RT-PCR最适反应条件的确立[J]. 乔宪凤,熊忠良,华文君,郑新民.  湖北畜牧兽医. 2001(01)
[8]猪流行性腹泻研究概况[J]. 倪艳秀,林继煌,何孔旺,还红华.  畜牧与兽医. 2001(01)
[9]间接法Dot-ELISA检测猪流行性腹泻抗体的研究[J]. 陈茹,罗琼,李树根,黄侠芳.  中国兽医杂志. 1997(08)
[10]应用直接免疫荧光法检测猪流行性腹泻病毒的研究[J]. 林志雄,黄引贤,李树根,李力复,童昆周.  中国进出境动植检. 1997(02)



本文编号：3571491