靶除肌抑素基因体细胞克隆蒙古羊的研究
发布时间：2022-01-06 02:59
近几年发现的抑制骨骼肌生长的负调控因子--肌肉生长抑制素（Myostatin, MSTN）,在遗传突变后,导致基因功能的失活,进而引起动物肌肉过度发育,肌纤维数量增多,直径增加,肌肉量急剧增加,动物表现为“双肌”眭状。于是,研究者们通过对肌抑素基因进行敲除、缺失,突变等基因修饰,来获得基因敲除的动物模型和克隆动物,以达到医学上和农业上的需求。对于本研究来说,蒙古羊是内蒙古自治区的优势物种之一,培育产肉性状优良,产肉率高的蒙古羊对于自治区的家畜育种具有重要意义。本研究选用妊娠30天的蒙古羊胎儿为材料,通过组织块贴壁法成功建立蒙古羊胎儿成纤维细胞系,用于MSTN基因的打靶实验。同时利用基因敲除技术在体外构建了针对蒙古羊MSTN基因的第三外显子缺失的敲除载体。主要构建了两个带有筛选标记的置换型载体和一个无筛选标记的TALEN敲除载体。主要结果如下1、委托华大基因测序公司对蒙古羊肌抑素基因进行测序,得到测序结果后与Genebank上发布的Ovies的MSTN基因序列进行比对,设计引物,成功克隆出蒙古羊肌抑素基因。2、设计引物,利用PCR技术,成功扩增到蒙古羊MSTN基因的两种同源长臂,大小分别...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
MSTN基因及蛋白质结构简图（下图中的9个圆圈表示保守的半肤氧酸位点）t”Fig.1SluclurediagramofMSTNgenieandprotein
ilFN 二聚体结合特碎丨)NA序列图2锋指核酸酶作用方式结构图Fig. 2 The structure picture of process of zinc finger nucleases1.2.2基因打IE技术的原理基因打把是在同源重组的基础上发展起来的。同源重组是通过两条同源染色
图3置换型载体与插入型载体的基本结构[‘'】Fig.3 '1 he basic structure of the displacement voclor and ihc insertion vector注：载体中的組线部分代表K位点的通原序列，细线部分则代表载体1:质粒的序列；方形为祀裡因外+ -分&.】代表正负选择蹄选基因；置换型载体在细胞转染前先进行线性化.插入型钱体在转染细胞前现序列内部迪行海切断裂，产生《链的断裂部分。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Generation of a monkey with MECP2 mutations by TALEN-based gene targeting[J]. Zhen Liu,Xue Zhou,Ying Zhu,Zhi-Fang Chen,Bin Yu,Yan Wang,Chen-Chen Zhang,Yan-Hong Nie,Xiao Sang,Yi-Jun Cai,Yue-Fang Zhang,Chen Zhang,Wen-Hao Zhou,Qiang Sun,Zilong Qiu. Neuroscience Bulletin. 2014(03)
[2]动物遗传育种研究进展[J]. 段芳,兰志刚,李卫娟. 黑龙江动物繁殖. 2011(04)
[3]cDNA Cloning of Goat DNA Methyltransferase 1,Screening of shRNA Vectors and Influences to Development of Nuclear Transfer Embryos[J]. LAN Jie,SONG Yong-li,HUA Song,LIU Yong-gang,LIU Jun,ZHANG Hai-lin and ZHANG Yong Key Laboratory of Animal Reproductive Physiology & Embryo Technology,Institution of Biotechnology,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2010(07)
[4]肌肉生长抑制素基因的研究进展及在动物遗传育种中的应用前景[J]. 陆海燕,孙伟. 江苏农业科学. 2009(06)
[5]转基因动物育种研究的现状与趋势[J]. 刘岩,童佳,张然,汤波,彭云乾,王淑辉,李宁. 中国医药生物技术. 2009(05)
[6]体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡[J]. 李碧春,孙国波,孙怀昌,徐琪,高波,周冠月,赵文明,吴信生,包文斌,余飞,陈国宏. 中国科学（C辑:生命科学）. 2008(07)
[7]影响克隆牛生产效率之因素研究[J]. 张家新,孟昭霞,张向利,郭丽丽,李继成,吴亦芳,孙青原,陈大元. 中国农学通报. 2007(12)
[8]DNA甲基化与克隆动物的发育异常[J]. 杨荣荣,李相运. 遗传. 2007(09)
[9]转基因技术改良家畜的现状与趋势[J]. 童佳,李宁. 中国农业科技导报. 2007(04)
[10]南海黄鸡肌抑素基因的克隆及序列分析[J]. 蓝赐华,刘为民,梁梓森. 广东农业科学. 2007(01)
博士论文
[1]PiggyBac转座子介导的嗜热菌β-糖苷酶转基因牛研究[D]. 王凌云.内蒙古农业大学 2012
[2]Myostatin对成肌细胞糖代谢的影响[D]. 叶建伟.中国协和医科大学 2006
本文编号：3571589
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
MSTN基因及蛋白质结构简图（下图中的9个圆圈表示保守的半肤氧酸位点）t”Fig.1SluclurediagramofMSTNgenieandprotein
ilFN 二聚体结合特碎丨)NA序列图2锋指核酸酶作用方式结构图Fig. 2 The structure picture of process of zinc finger nucleases1.2.2基因打IE技术的原理基因打把是在同源重组的基础上发展起来的。同源重组是通过两条同源染色
图3置换型载体与插入型载体的基本结构[‘'】Fig.3 '1 he basic structure of the displacement voclor and ihc insertion vector注：载体中的組线部分代表K位点的通原序列，细线部分则代表载体1:质粒的序列；方形为祀裡因外+ -分&.】代表正负选择蹄选基因；置换型载体在细胞转染前先进行线性化.插入型钱体在转染细胞前现序列内部迪行海切断裂，产生《链的断裂部分。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Generation of a monkey with MECP2 mutations by TALEN-based gene targeting[J]. Zhen Liu,Xue Zhou,Ying Zhu,Zhi-Fang Chen,Bin Yu,Yan Wang,Chen-Chen Zhang,Yan-Hong Nie,Xiao Sang,Yi-Jun Cai,Yue-Fang Zhang,Chen Zhang,Wen-Hao Zhou,Qiang Sun,Zilong Qiu. Neuroscience Bulletin. 2014(03)
[2]动物遗传育种研究进展[J]. 段芳,兰志刚,李卫娟. 黑龙江动物繁殖. 2011(04)
[3]cDNA Cloning of Goat DNA Methyltransferase 1,Screening of shRNA Vectors and Influences to Development of Nuclear Transfer Embryos[J]. LAN Jie,SONG Yong-li,HUA Song,LIU Yong-gang,LIU Jun,ZHANG Hai-lin and ZHANG Yong Key Laboratory of Animal Reproductive Physiology & Embryo Technology,Institution of Biotechnology,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling 712100,P.R.China. Agricultural Sciences in China. 2010(07)
[4]肌肉生长抑制素基因的研究进展及在动物遗传育种中的应用前景[J]. 陆海燕,孙伟. 江苏农业科学. 2009(06)
[5]转基因动物育种研究的现状与趋势[J]. 刘岩,童佳,张然,汤波,彭云乾,王淑辉,李宁. 中国医药生物技术. 2009(05)
[6]体内外精原干细胞介导大群生产转基因鸡[J]. 李碧春,孙国波,孙怀昌,徐琪,高波,周冠月,赵文明,吴信生,包文斌,余飞,陈国宏. 中国科学（C辑:生命科学）. 2008(07)
[7]影响克隆牛生产效率之因素研究[J]. 张家新,孟昭霞,张向利,郭丽丽,李继成,吴亦芳,孙青原,陈大元. 中国农学通报. 2007(12)
[8]DNA甲基化与克隆动物的发育异常[J]. 杨荣荣,李相运. 遗传. 2007(09)
[9]转基因技术改良家畜的现状与趋势[J]. 童佳,李宁. 中国农业科技导报. 2007(04)
[10]南海黄鸡肌抑素基因的克隆及序列分析[J]. 蓝赐华,刘为民,梁梓森. 广东农业科学. 2007(01)
博士论文
[1]PiggyBac转座子介导的嗜热菌β-糖苷酶转基因牛研究[D]. 王凌云.内蒙古农业大学 2012
[2]Myostatin对成肌细胞糖代谢的影响[D]. 叶建伟.中国协和医科大学 2006
本文编号：3571589
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3571589.html
