猪瘟病毒非结构蛋白NS5A与宿主蛋白的相互作用研究

发布时间：2022-01-07 12:57

　　病毒是简单的、具有生态性的细胞内寄生生物,其复制的全部过程都须依赖细胞提供的分子生态条件。病毒在宿主细胞复制增殖所需要的细胞内分子环境条件,包括细胞基因组的结构变化、表达调控以及宿主因子直接参与病毒的感染、复制的生命循环。猪瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）重要成员,是有囊膜的单股正链RNA病毒。CSFV基因组编码Erns、E1、E2、C四个结构蛋白和Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、 NS5A、NS5B等八个非结构蛋白。CSFV感染猪导致以出血性高热和免疫抑制为主要特征、具有高发病率和高死亡率的烈性传染病——猪瘟（classical swine fever, CSF）。目前,CSF仍是危害我国养猪业最为严重的传染病。为了鉴定与CSFV NS5A相互作用并参与CSFV复制的宿主蛋白,本研究利用重组表达载体pEGX-6p-NS5AC诱导表达了NS5A碳端蛋白片段（NS5AC）,用重组蛋白GST-NS5AC与PK-15细胞裂解蛋白共孵育,pull down细胞蛋... 

【文章来源】：东北大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 病毒分子生态学
        1.2.1 病毒生态研究的层次
        1.2.2 病毒分子生态学
    1.3 猪瘟病毒及其致病机理
        1.3.1 猪瘟病毒整体结构
        1.3.2 猪瘟病毒基因组结构特征
        1.3.3 猪瘟病毒编码的蛋白及其功能
        1.3.4 猪瘟病毒的致病机理
    1.4 病毒与宿主相互作用的研究概况
        1.4.1 丙型肝炎病毒与宿主相互作用的研究
        1.4.2 HIV病毒与宿主相互作用研究
        1.4.3 牛病毒性腹泻病毒与宿主相互作用
        1.4.4 猪瘟病毒与宿主蛋白相互作用的研究
    1.5 本论文目标及设计思路
第2章 实验部分
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器及设备
        2.1.3 实验器材及有关溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 PK-15细胞培养
            2.2.1.1 PK-15细胞的复苏
            2.2.1.2 PK-15细胞的传代培养
            2.2.1.3 PK-15细胞的冻存
        2.2.2 GST-NS5AC的诱导表达与纯化
        2.2.3 pull down
        2.2.4 质谱鉴定
        2.2.5 真核表达载体的构建
        2.2.6 转染PK-15细胞
        2.2.7 免疫共沉淀
        2.2.8 Westernblot
第3章 实验结果与讨论
    3.1 GST-NS5AC的诱导表达与纯化
    3.2 pull down
    3.3 质谱鉴定
    3.4 Western blot检验相互作用蛋白
    3.5 真核表达载体的构建
        3.5.1 NS5AC基因的扩增
        3.5.2 NS5AC和pCMV-myc载体的双酶切
        3.5.3 NS5AC基因和pCMV-myc载体的连接与转化
        3.5.4 重组子PCR阳性鉴定
    3.6 转染及间接免疫荧光检测
    3.7 免疫共沉淀结合Western blot
    3.8 讨论
第4章 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟病毒的研究综述[J]. 李丛丛,李秋艳.  科技信息. 2009(27)
[2]猪瘟病毒及其致病机制研究进展[J]. 田宏,刘湘涛,张彦明,林彤,吴锦艳,谢庆阁.  动物医学进展. 2007(S1)
[3]猪瘟病毒研究进展[J]. 陈龙宾.  猪业科学. 2006(03)
[4]猪瘟病毒非结构蛋白NS2基因不同片段的克隆及在原核系统中的高效表达[J]. 郭东春,钱平,李祥敏,徐卓菲,姚清侠,金梅林,陈焕春.  中国预防兽医学报. 2006(01)
[5]瘟病毒致细胞病变的遗传机制及其非结构蛋白的功能[J]. 孙世琪,郭慧琛,邱昌庆,刘湘涛.  中国兽医科技. 2002(11)
[6]猪瘟病毒生物学特性研究的一些新进展[J]. 罗廷荣.  广西农业生物科学. 2001(01)



本文编号：3574587