昆虫细胞-杆状病毒系统分泌表达的猪瘟病毒E2蛋白及其免疫原性研究

发布时间：2022-01-08 20:09

　　为研制新型、可用于区分野毒感染、助力猪瘟净化的亚单位疫苗,本研究参考了近年来国内猪瘟病毒（CSFV）流行株的E2基因序列,并根据昆虫细胞密码子偏嗜性对其进行优化、合成后,克隆至转移载体中,构建了重组质粒,随后转化至含有穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac,制备了重组杆粒并转染至SF9细胞,获得了表达E2基因的重组杆状病毒。间接免疫荧光试验和western blot检测结果显示该杆状病毒感染昆虫细胞后可正确表达E2蛋白（Bac-E2）。将Bac-E2（50μg/头份）与猪瘟兔化弱毒疫苗[HCLV,7500半数兔体感染剂量（RID50）/头份]分别免疫猪瘟抗体阴性仔猪,3周后用相同的剂量加强免疫。首免后5周Bac-E2组猪CSFV中和抗体均不低于11 024,显著高于HCLV组（p<0.01）;首免后35 d,利用105.0MLD（最小致死剂量）的CSFV石门强毒经耳后颈部肌肉注射攻毒后,Bac-E2和HCLV组猪的保护率均为100%,阴性对照组猪全部发病、死亡;采用荧光定量PCR检测各组猪口腔和肛门拭子中CSFV的排毒情况,结果显示Bac-E2和HCLV组猪攻毒后0～16 d的咽拭子及... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(04)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组杆状病毒的PCR鉴定

将P5代重组杆状病毒以10倍倍比稀释后接种SF9细胞，7 d后进行IFA鉴定。结果显示，感染病毒的细胞可观察到特异的绿色荧光，而阴性对照则未出现荧光（图2），表明获得了重组杆状病毒，且杆状病毒中的CSFV E2基因能够在昆虫细胞中获得正确表达。根据Reed-Muench方法计算重组杆状病毒滴度为107.8TCID50/mL。2.3 重组杆状病毒的western blot鉴定结果

将P5代Rb-E2接种生长良好的High Five悬浮细胞，收获的上清液经western blot鉴定。结果显示，经杆状病毒感染60 h的细胞即可出现大小为52 ku的目的蛋白条带；接种杆状病毒后96 h，上清液中Bac-E2含量最高（图3），经SDS-PAGE电泳后采用灰光度值法测定蛋白浓度可达50μg/m L，表明获得了能够表达CSFV E2蛋白的重组杆状病毒Rb-E2，表达的Bac-E2主要存在于细胞上清液中，且具有良好的反应原性。2.4 Bac-E2的免疫效力评价

【参考文献】：
期刊论文
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[7]猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾[J]. 仇华吉,童光志,沈荣显.  中国农业科学. 2005(08)
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博士论文
[1]猪瘟病毒C株重组标记疫苗候选株免疫原性与鉴别检测[D]. 廖迅.浙江大学 2016



本文编号：3577200