Let7b介导FGF5表达调控羊驼毛生长的研究
发布时间：2022-01-09 09:55
microRNA是一类非常小的内源性RNA分子,近年来研究发现正常皮肤发育需要miRNA参与。microRNA中的Let-7b可通过其靶基因调控动物毛发生长。成纤维细胞生长因子5（FGF5）与动物毛囊周期生长相关。文献报道结合软件预测FGF5是let-7b的靶基因之一,但尚未进行实验验证。本研究利用软件预测let-7b与FGF5结合位点并构建FGF5基因3’-UTR段双荧光素报告载体,转染293T细胞后检测荧光素酶活性。let-7b真核过表达载体转染羊驼成纤维细胞,检测转染后基因FGF5及受体fgfrl表达水平变化,探讨microRNA和毛发生长相关基因相互作用影响羊驼毛生长的机制。本实验研究内容和结果如下：（1）从NCBI核酸库中查找FGF5基因3’-UTR段的碱基序列,用软件设计引物,加入酶切位点连接到pmirGLO载体上。构建let-7b的真核表达载体pcDNA6.2TM-GW/EmGFP,与pmirGLO重组质粒共转染293T细胞。结果证明共转染后细胞组的荧光素酶活性比值是对照组的2.548倍,说明双荧光素报告载体构建成功,并且1et-7b与FGF5为靶向关系。（2） let-...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转染后细胞焚光素活性比值(*代表P〈0.05)
图2-2 let-7b转染成纤维细胞形态观察Fig， 2-2 The morphology of Transfected fibroblasts2.2 let-7b转染羊驻成纤维细胞的效率
(3)基因FGF5和fgfrl定量结果分别用let-7b真核过表达载体，空质粒载体（Negtive Control)转染细胞后，进行基因FGF5和fgfrl表达水平变化的检测。结果见表2-7A和B和图2-8A和B。表2-7A FGF5基因在不同组中劳光定量结果Table2-7A Real-time PGR results of FGF5 gene in different groups基因 ^ 差异倍数Gene Gmop ACT AACT Fold difference转染 let-7b 组 18.626±0.041 1.914±0.041 0.287FGF5 转染 NC 组 17.557±0.092 0.846±0.092 0.557 细胞组 16. 631 ±0.082 -0. 080±0.082 1-33 -
【参考文献】：
期刊论文
[1]FGF5在青年羊驼背部和耳部皮肤中的表达和定位[J]. 刘丹丹,张志宇,赫晓燕,董彦君,朱芷葳,白瑞,张杰,郝欢庆,邢海权. 中国生物化学与分子生物学报. 2011(05)
[2]青年羊驼耳部和背部皮肤组织中miRNA差异表达研究[J]. 赫晓燕,郝欢庆,刘丹丹,范瑞文,曹靖,朱芷葳,董彦君,邢海权. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(11)
[3]内皮素受体B在不同毛色羊驼皮肤中的表达与定位[J]. 耿建军,穆晓丽,孙乐天,姜俊兵,张杰,李宏全,张映,董常生. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[4]Detection of let-7a microRNA by real-time PCR in gastric carcinoma[J]. Hong-He Zhang,Xian-Jun Wang,Guo-Xiong Li,Diagnostic Laboratory,Hangzhou First People’s Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China En Yang,Ning-Min Yang,Zhiyuan Medical Laboratory,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[5]毛囊形态发生的分子机制[J]. 李国强,纪影畅,李宇. 国外医学(皮肤性病学分册). 2004(01)
本文编号：3578482
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转染后细胞焚光素活性比值(*代表P〈0.05)
图2-2 let-7b转染成纤维细胞形态观察Fig， 2-2 The morphology of Transfected fibroblasts2.2 let-7b转染羊驻成纤维细胞的效率
(3)基因FGF5和fgfrl定量结果分别用let-7b真核过表达载体，空质粒载体（Negtive Control)转染细胞后，进行基因FGF5和fgfrl表达水平变化的检测。结果见表2-7A和B和图2-8A和B。表2-7A FGF5基因在不同组中劳光定量结果Table2-7A Real-time PGR results of FGF5 gene in different groups基因 ^ 差异倍数Gene Gmop ACT AACT Fold difference转染 let-7b 组 18.626±0.041 1.914±0.041 0.287FGF5 转染 NC 组 17.557±0.092 0.846±0.092 0.557 细胞组 16. 631 ±0.082 -0. 080±0.082 1-33 -
【参考文献】：
期刊论文
[1]FGF5在青年羊驼背部和耳部皮肤中的表达和定位[J]. 刘丹丹,张志宇,赫晓燕,董彦君,朱芷葳,白瑞,张杰,郝欢庆,邢海权. 中国生物化学与分子生物学报. 2011(05)
[2]青年羊驼耳部和背部皮肤组织中miRNA差异表达研究[J]. 赫晓燕,郝欢庆,刘丹丹,范瑞文,曹靖,朱芷葳,董彦君,邢海权. 中国生物化学与分子生物学报. 2010(11)
[3]内皮素受体B在不同毛色羊驼皮肤中的表达与定位[J]. 耿建军,穆晓丽,孙乐天,姜俊兵,张杰,李宏全,张映,董常生. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[4]Detection of let-7a microRNA by real-time PCR in gastric carcinoma[J]. Hong-He Zhang,Xian-Jun Wang,Guo-Xiong Li,Diagnostic Laboratory,Hangzhou First People’s Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China En Yang,Ning-Min Yang,Zhiyuan Medical Laboratory,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[5]毛囊形态发生的分子机制[J]. 李国强,纪影畅,李宇. 国外医学(皮肤性病学分册). 2004(01)
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