羊传染性脓疱病毒B2L基因重组山羊痘病毒的构建及初步评价
发布时间：2022-01-09 11:23
羊传染性脓疱病是由羊传染性脓疱病毒引起的绵羊、山羊等反刍动物以及人类的一种急性、高度嗜上皮性、接触性传染病。该病在世界养羊业发达的国家和地区广泛流行，危害较大，造成严重的经济损失，目前尚无有效的治疗药物；接种疫苗被认为是控制该病可靠而有效的手段。当前常规弱毒苗和灭活苗存在毒力返强、不安全、免疫保护率不高等缺点，急需开发一种新型的候选疫苗株以便更好的预防该病的发生和流行。羊痘病毒作为载体表达外源基因的有效性已经被大量研究所证实。因此，本研究选取商品化的山羊痘弱毒疫苗作为载体，构建表达羊传染性脓疱病毒B2L基因的重组山羊痘病毒，并对其遗传稳定性、理化特性和免疫原性进行检测和初步评价，旨在获得能同时预防山羊痘和羊传染性脓疱病的双价基因工程疫苗。为此，本研究主要开展以下研究工作：1.分离鉴定羊传染性脓疱病毒。对新疆地区疑似羊传染性脓疱病的羔羊唇部结痂进行采集，研磨过滤后接种Vero细胞，分离培养病毒，待出现明显细胞病变时，收集细胞进行电镜观察；通过PCR技术扩增羊传染性脓疱病毒B2L基因，进行测序分析。同时对该分离株和Genbank上公布的中国其他省市区的30个分离株的B2L基因序列进行生物信...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增B2L基因M.DL4500Marker；1-3.B2L基因片段；4.阴性对照
图 1-3 PCR 扩增 B2L 基因M.DL4500 Marker；1-3.B2L 基因片段；4.阴性对照Fig.1-3 PCR amplification of B2L geneL4500 Marker; 1-2. PCR product of LacZ gene; 3. Negative液 PCR 鉴定产物与 T 载体进行连接，挑取 pMD18-T-B2L 的单性引物对目的基因 B2L 进行菌液 PCR 检测，经增到的条带与 B2L 目的片段大小一致（见图 1-4
图 1-5 pMD18-T-B2L 重组质粒的酶切鉴定7000 Marker；1-2. pMD18-T-B2L 的 Sam I 单酶切；3.质g.1-5 Identification of plasmid pMD18-T-B2L digested by 00 Marker; 1-2. pMD18-T-B2L digested by Sam I; 3. plas析及进化树构建析发现该 ORFV 分离株 B2L 基因全长 1137bp该分离株与 Genbank 上公布的中国其他地区 3为 96.0%-99.1%，氨基酸的同源性为 88.7%-99离株与 NX/YC-2010 株亲缘关系最近（见图 1
【参考文献】：
期刊论文
[1]日本血吸虫章鱼胺受体基因的克隆表达及分析[J]. 孟培培,魏梅梅,熊雅念,黄莉妮,艾德宙,洪炀,伍妙梨,程相朝,林矫矫,傅志强. 中国兽医科学. 2013(08)
[2]猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 李玉明,王刚,汪志艳,刘永刚,涂亚斌,王淑杰,姜成刚,王延群,蔡雪辉. 中国预防兽医学报. 2013(05)
[3]牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 魏锁成,巩转娣,车团结,田风林. 中国预防兽医学报. 2013(02)
[4]进口海兰褐祖代鸡禽白血病感染状态的持续观察及与国内发病鸡群种蛋p27检出率、病毒分离率的相关性[J]. 王丽,李传龙,赵鹏,李德庆,张青婵,李中明,崔治中. 中国兽医学报. 2013(01)
[5]羊传染性脓疱病毒趋化因子结合蛋白（CBP）基因的克隆及表达分析[J]. 王改丽,赵魁,兰云刚,贺文琦,陆慧君,解胜男,苏高莉,张冰冰,宋德光,高丰. 中国兽医学报. 2011(08)
[6]羊痘病毒载体研究进展[J]. 朱学亮,张强,杨帆,才学鹏. 中国畜牧兽医. 2009(05)
[7]表达LacZ基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特征研究[J]. 王芳,刘胜旺,邵昱昊,陈洪岩. 中国预防兽医学报. 2007(09)
[8]山羊痘病毒疫苗株ORF64—ORF67的分子特征[J]. 王芳,陈洪岩,刘胜旺. 中国预防兽医学报. 2007(02)
[9]山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析[J]. 鞠厚斌,张强,袁明,施程洪,韩若婵,谢芳,吴国华,颜新敏,李健,朱海霞,朱彩珠,卫广森. 中国兽医科学. 2007(03)
[10]表达外源绿荧光蛋白重组山羊痘病毒的构建及纯化[J]. 程小文,胡森,王喜军,鲍恩东,步志高. 农业生物技术学报. 2006(05)
博士论文
[1]口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究[D]. 金明兰.吉林大学 2007
硕士论文
[1]小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定[D]. 南文金.扬州大学 2009
本文编号：3578623
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增B2L基因M.DL4500Marker；1-3.B2L基因片段；4.阴性对照
图 1-3 PCR 扩增 B2L 基因M.DL4500 Marker；1-3.B2L 基因片段；4.阴性对照Fig.1-3 PCR amplification of B2L geneL4500 Marker; 1-2. PCR product of LacZ gene; 3. Negative液 PCR 鉴定产物与 T 载体进行连接，挑取 pMD18-T-B2L 的单性引物对目的基因 B2L 进行菌液 PCR 检测，经增到的条带与 B2L 目的片段大小一致（见图 1-4
图 1-5 pMD18-T-B2L 重组质粒的酶切鉴定7000 Marker；1-2. pMD18-T-B2L 的 Sam I 单酶切；3.质g.1-5 Identification of plasmid pMD18-T-B2L digested by 00 Marker; 1-2. pMD18-T-B2L digested by Sam I; 3. plas析及进化树构建析发现该 ORFV 分离株 B2L 基因全长 1137bp该分离株与 Genbank 上公布的中国其他地区 3为 96.0%-99.1%，氨基酸的同源性为 88.7%-99离株与 NX/YC-2010 株亲缘关系最近（见图 1
【参考文献】：
期刊论文
[1]日本血吸虫章鱼胺受体基因的克隆表达及分析[J]. 孟培培,魏梅梅,熊雅念,黄莉妮,艾德宙,洪炀,伍妙梨,程相朝,林矫矫,傅志强. 中国兽医科学. 2013(08)
[2]猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 李玉明,王刚,汪志艳,刘永刚,涂亚斌,王淑杰,姜成刚,王延群,蔡雪辉. 中国预防兽医学报. 2013(05)
[3]牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 魏锁成,巩转娣,车团结,田风林. 中国预防兽医学报. 2013(02)
[4]进口海兰褐祖代鸡禽白血病感染状态的持续观察及与国内发病鸡群种蛋p27检出率、病毒分离率的相关性[J]. 王丽,李传龙,赵鹏,李德庆,张青婵,李中明,崔治中. 中国兽医学报. 2013(01)
[5]羊传染性脓疱病毒趋化因子结合蛋白（CBP）基因的克隆及表达分析[J]. 王改丽,赵魁,兰云刚,贺文琦,陆慧君,解胜男,苏高莉,张冰冰,宋德光,高丰. 中国兽医学报. 2011(08)
[6]羊痘病毒载体研究进展[J]. 朱学亮,张强,杨帆,才学鹏. 中国畜牧兽医. 2009(05)
[7]表达LacZ基因的重组山羊痘病毒的构建及其生物学特征研究[J]. 王芳,刘胜旺,邵昱昊,陈洪岩. 中国预防兽医学报. 2007(09)
[8]山羊痘病毒疫苗株ORF64—ORF67的分子特征[J]. 王芳,陈洪岩,刘胜旺. 中国预防兽医学报. 2007(02)
[9]山羊痘弱毒疫苗株TK基因的克隆及序列分析[J]. 鞠厚斌,张强,袁明,施程洪,韩若婵,谢芳,吴国华,颜新敏,李健,朱海霞,朱彩珠,卫广森. 中国兽医科学. 2007(03)
[10]表达外源绿荧光蛋白重组山羊痘病毒的构建及纯化[J]. 程小文,胡森,王喜军,鲍恩东,步志高. 农业生物技术学报. 2006(05)
博士论文
[1]口蹄疫病毒基因重组鸡痘病毒活载体疫苗系统鉴定研究[D]. 金明兰.吉林大学 2007
硕士论文
[1]小反刍兽疫病毒H基因重组山羊痘病毒的构建和鉴定[D]. 南文金.扬州大学 2009
本文编号：3578623
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