马腺疫链球菌的分离鉴定及FN结合蛋白免疫原性的研究

发布时间：2022-01-09 14:30

　　本实验通过分离鉴定马腺疫链球菌新疆株并对马腺疫链球菌新疆株的FNE和FNEB基因的克隆及原核表达，获得FNE和FNEB截短基因编码的蛋白，并免疫小鼠分析表达产物的免疫原性。本研究从马腺疫病马的脓汁中分离纯化得到革兰氏阳性球菌，经生化和PCR鉴定出该菌为马腺疫链球菌，其对小鼠具有致病性。采用特异性引物PCR扩增马腺疫链球菌新疆株FNE基因片段和FNEB基因部分片段，克隆至pMD19-T载体。利用分子生物学软件分析测序结果，将FNE和FNEB部分基因亚克隆至原核表达载体pET-30a中，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，以IPTG诱导FNE和FNEB重组蛋白的表达，经SDS-PAGE分析在46kD和58kD处出现明显条带， Westernblot分析显示具有反应原性。纯化表达的融合蛋白免疫小鼠，以马腺疫链球菌新疆分离株攻毒免疫的小鼠后，FNE免疫组小鼠无保护力而FNEB免疫组小鼠的保护率约为60%，表明FNEB蛋白具有较好的免疫保护性。本研究成功的从新疆伊犁地区分离出一株马腺疫链球菌新疆株，成功克隆和表达了马腺疫链球菌的FNE和FNEB截短基因，免疫小鼠获得较好的保护效果，为重组马... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

粘附于扁桃体上皮的马链球菌Fig1.1ScanningelectronmicrographshowingbindingofS.equitolingualtonsilepithelium

物致病性实验性分离株的纯培养物制备成悬液，给每只小鼠腹腔注射 0./mL），共 6 只小白鼠，4 只注射肉浸肉汤培养液及作为阴性对照，4小鼠的死亡情况。果原分离菌的革兰氏染色结果琼脂平板上可以看到边缘整齐，中间隆起的灰白色的小菌落，挑取检（图 2.1），在视野里面能够看到被染色成为蓝紫色的呈链状的球球菌连在一起，少数的几十个连在一起呈长链状。

NAStar 软件将测序的结果与已报道的其它的马腺疫链PSa 分析蛋白质的二级结构；ExPASy 分析 FNEB 蛋测； DNAStar 软件分析其疏水性、抗原性。EB 基因的 PCR 扩增结果球菌总 DNA 为模板，用特异性引物进行 PCR 扩增，条 1 860 bp 和一条 1 425 bp 的清晰条带，与预期结果并将回收产物链接于 pMD19-T 载体并转入 DH5α，挑

【参考文献】：
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硕士论文
[1]马链球菌兽疫亚种纤连蛋白结合蛋白功能片段的确定及免疫保护试验[D]. 耿建新.南京农业大学 2007



本文编号：3578893