水牛SUV39H1基因shRNA片段的筛选及对外源转基因表达效率的影响

发布时间：2022-01-10 03:45

　　转基因动物制备过程中,外源基因的表达水平受到很多因素的影响,其中表观遗传修饰是影响外源基因表达效率的一个重要因素。表观遗传修饰中,由花斑抑制因子同源物（suppressor of variegation3-9homolog1SUV39H1）基因所催化的组蛋白H3第9位赖氨酸残基位点的二甲基化和三甲基化（H3K9me2/3）作用尤为突出。本研究对抑制水牛SUV39H1基因表达的shRNA干扰序列进行了筛选,通过抑制稳定表达干扰素a-2b（interferon a-2b IFNa-2b）的Bcap-37细胞系中内源SUV39H1基因的表达,探讨其对外源转IFNa-2b基因表达效率的影响及其作用机理,为寻找提高转基因动物中外源基因的表达效率提供新的思路和方法。一、SUV39H1表达载体构建及其shRNA片段的筛选1.克隆水牛SUV39H1基因3’UTR和ORF全长序列,预测水牛SUV39H1基因的miRNA序列,构建表达水牛SUV39H1基因的融合表达载体,并在细胞水平上进行检测。结果发现,与黄牛相比,水牛SUV39H1基因的ORF和3’UTR序列与其同源性分别为99%和95%；ORF序列比... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
英文縮略词
第一部分 文献综述
    第一章 组蛋白甲基化
        1 组蛋白甲基化概述
        2 组蛋白甲基化种类
            2.1 H3K4
            2.2 H3K36
            2.3 H3K27
            2.4 H3K9
            2.5 H3K20
    第二章 SUV39H1基因研究进展
        1 研究历史
        2 SUV39H1基因的结构与分布
        3 SUV39H1基因的功能及其作用机制
            3.1 SUV39H1基因与异染色质的形成
            3.2 SUV39H1与基因的转录表达
            3.3 SUV39H1和DNA甲基化的关系
            3.4 SUV39H1与组蛋白乙酰化
第二部分 试验研究
    第三章 SUV39H1表达载体构建及其shRNA片段的筛选
        第一节 水牛SUV39H1基因克隆及其融合表达载体构建
            摘要
            1 材料与方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 结果
                2.1 水牛SUV39H1基因ORF克隆与序列分析
                2.2 水牛SUV39H1基因3'UTR序列克隆及分析
                2.3 pEGFP-N1-SUV39H1重组质粒酶切鉴定
                2.4 pEGFP-N1-SUV39H1重组质粒表达检测
            3 分析与讨论
            4 结论
        第二节 SUV39H1基因在水牛卵泡发育过程中的表达规律
            摘要
            1 材料与方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 结果
            3 分析与讨论
            4 结论
        第三节 水牛SUV39H1基因shRNA表达载体构建及筛选
            摘要
            1 材料与方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 结果
                2.1 水牛SUV39H1基因shRNA片段在目的基因靶位点的分析
                2.2 SUV39H1基因shRNA重组质粒的酶切验证
                2.3 SUV39H1基因shRNA抑制效率检测
                    2.3.1. 荧光观察检测
                    2.3.2 qRT-PCR检测分析
                    2.3.3 Western-blot分析
            3 分析与讨论
            4 结论
    第四章 SUV39H1基因shRNA对转IFNα-2b基因细胞相关基因表达的影响
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 SUV39H1基因shRNA慢病毒包装及滴度分析
            2.2 SUV39H1基因shRNA病毒感染稳定表达IFNα-2b基因Bcap-37细胞系
                2.2.1 定量PCR检测
                2.2.2 IFNα-2b蛋白的Western-blot分析
        3. 分析与讨论
        4 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录



本文编号：3579991