黑素细胞分布规律及基因差异表达
发布时间：2022-01-12 20:51
本试验通过组织化学染色和实时荧光定量PCR方法,研究乌骨山羊黑色素细胞的分布规律、形态以及与黑色素沉积密切相关基因在乌骨山羊不同组织器官中的表达含量差异,以探讨乌骨山羊乌质性状的形成原因,为进一步研究乌骨山羊黑色素沉积的细胞学基础提供依据,为研究骨山羊黑色素合成相关基因的分子遗传机理提供参考。我们采用免疫组织化学染色、多巴组织化学染色和HE染色法对乌骨山羊组织器官中的黑色素细胞进行染色定位,确定乌骨山羊黑色素细胞的分布及形态特点；采用实时荧光定量PCR对乌骨山羊组织器官中小眼畸形转录因子（MITF）、黑皮质素受体-1（MC1R）、内皮素3（EDN3）、酪氨酸酶（TYR）及其家族基因酪氨酸关联蛋白1（TYRP1）和酪氨酸关联蛋白2（TYRP2）基因的转录水平进行测定。免疫组织化学结果显示,黑素细胞主要分布在乌骨山羊的表皮基底层和毛囊中；其他组织中未见黑色素细胞的分布。多巴组化染色结果显示黑色素细胞主要分布在黑色被毛毛球部及外根鞘部位并且黑色被毛毛球部及外根鞘部位的黑色素细胞能合成黑色素颗粒,其他组织中未见黑色素细胞的分布。HE染色结果显示,黑色素细胞主要分布在乌骨山羊黑色被毛的毛囊外毛根...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 前言
1.1 黑色素细胞与黑色素概述
1.1.1 黑色素细胞的起源
1.1.2 黑色素细胞的分布
1.1.3 黑色素细胞的结构
1.1.4 黑色素的分泌
1.2 影响动物黑色素形成的相关基因
1.3 荧光定量PCR
1.4 本研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验地点
2.2 试验动物
2.3 主要药品和试剂
2.4 主要仪器设备
2.5 主要试剂配制
2.5.1 免疫组化实验试剂配制
2.5.2 多巴组织化学实验试剂配制
2.5.3 苏木素-伊红(HE)染色实验试剂配制
3 试验方法
3.1 免疫组织化学染色方法
3.1.1 组织固定与蜡块制作
3.1.2 制作石蜡切片
3.1.3 免疫组化染色步骤
3.2 多巴组织化学染色方法
3.2.1 组织固定与蜡块制作
3.2.2 制作石蜡切片
3.2.3 多巴组织化学(DOPA)染色步骤
3.3 苏木素-伊红(HE)染色方法
3.3.1 组织固定与蜡块制作
3.3.2 制作石蜡切片
3.3.3 苏木素-伊红(HE)染色步骤
3.4 引物设计与合成
3.5 组织的RNA的提取与检测
3.6 cDNA第一条链的合成
3.7 荧光定量PCR
3.8 统计方法与分析软件
4 结果与分析
4.1 免疫组织化学染色对黑色素细胞分布规律的研究
4.2 多巴组织化学染色对黑色素细胞分布规律的研究
4.3 HE染色对黑色素细胞分布特征的研究
4.4 总RNA的提取与检测
4.5 反转录结果
4.6 MITF在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.7 MC1R在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.8 EDN3在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.9 TYR在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.10 TYRP1在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.11 TYRP2在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.12 乌骨山羊不同被毛颜色皮肤中基因的mRNA转录水平
5 讨论
5.1 黑色素细胞的标记方法与特点
5.2 乌骨山羊黑色素细胞的分布规律与形态特点
5.3 TYRP1对乌骨山羊毛色和肤色的形成作用
6 全文结论
参考文献
在读期间发表论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]乌骨山羊生活习性与行为的初步研究[J]. 张腾龙,姜勋平,李先喜,刘桂琼. 中国草食动物科学. 2012(03)
[2]内皮素受体B在不同毛色羊驼皮肤中的表达与定位[J]. 耿建军,穆晓丽,孙乐天,姜俊兵,张杰,李宏全,张映,董常生. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[3]羊驼酪氨酸酶基因家族在不同毛色个体中的基因表达水平[J]. 高莉,董常生,赫晓燕,贺俊平,耿建军,范瑞文,朱芷薇,游蓉丽. 畜牧兽医学报. 2008(07)
[4]从人外毛根鞘细胞分离获取黑素母细胞[J]. 卢涛,金岩,刘源,雷娟,刘晓亮. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(37)
[5]乌骨绵羊和黑色素的研究进展[J]. 李文,邓卫东,毛华明. 家畜生态学报. 2007(03)
[6]外毛根鞘无色素性黑素细胞的免疫组化研究[J]. 谭城,朱文元,鲁严. 中国皮肤性病学杂志. 2006(02)
[7]MC1R是控制鸡黑色素形成的候选主效基因[J]. 杨永升,邓学梅,李宁,傅衍,朱睦元,吴常信. 生物化学与生物物理进展. 2004(06)
[8]毛囊外根鞘NKI/beteb和HMB-45免疫组化及胰酶消化后细胞的电镜观察[J]. 张汝芝,朱文元,马慧军,王大光. 临床皮肤科杂志. 2003(10)
本文编号：3585442
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词表
1 前言
1.1 黑色素细胞与黑色素概述
1.1.1 黑色素细胞的起源
1.1.2 黑色素细胞的分布
1.1.3 黑色素细胞的结构
1.1.4 黑色素的分泌
1.2 影响动物黑色素形成的相关基因
1.3 荧光定量PCR
1.4 本研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 试验地点
2.2 试验动物
2.3 主要药品和试剂
2.4 主要仪器设备
2.5 主要试剂配制
2.5.1 免疫组化实验试剂配制
2.5.2 多巴组织化学实验试剂配制
2.5.3 苏木素-伊红(HE)染色实验试剂配制
3 试验方法
3.1 免疫组织化学染色方法
3.1.1 组织固定与蜡块制作
3.1.2 制作石蜡切片
3.1.3 免疫组化染色步骤
3.2 多巴组织化学染色方法
3.2.1 组织固定与蜡块制作
3.2.2 制作石蜡切片
3.2.3 多巴组织化学(DOPA)染色步骤
3.3 苏木素-伊红(HE)染色方法
3.3.1 组织固定与蜡块制作
3.3.2 制作石蜡切片
3.3.3 苏木素-伊红(HE)染色步骤
3.4 引物设计与合成
3.5 组织的RNA的提取与检测
3.6 cDNA第一条链的合成
3.7 荧光定量PCR
3.8 统计方法与分析软件
4 结果与分析
4.1 免疫组织化学染色对黑色素细胞分布规律的研究
4.2 多巴组织化学染色对黑色素细胞分布规律的研究
4.3 HE染色对黑色素细胞分布特征的研究
4.4 总RNA的提取与检测
4.5 反转录结果
4.6 MITF在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.7 MC1R在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.8 EDN3在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.9 TYR在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.10 TYRP1在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.11 TYRP2在乌骨山羊不同组织中的mRNA转录水平
4.12 乌骨山羊不同被毛颜色皮肤中基因的mRNA转录水平
5 讨论
5.1 黑色素细胞的标记方法与特点
5.2 乌骨山羊黑色素细胞的分布规律与形态特点
5.3 TYRP1对乌骨山羊毛色和肤色的形成作用
6 全文结论
参考文献
在读期间发表论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]乌骨山羊生活习性与行为的初步研究[J]. 张腾龙,姜勋平,李先喜,刘桂琼. 中国草食动物科学. 2012(03)
[2]内皮素受体B在不同毛色羊驼皮肤中的表达与定位[J]. 耿建军,穆晓丽,孙乐天,姜俊兵,张杰,李宏全,张映,董常生. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[3]羊驼酪氨酸酶基因家族在不同毛色个体中的基因表达水平[J]. 高莉,董常生,赫晓燕,贺俊平,耿建军,范瑞文,朱芷薇,游蓉丽. 畜牧兽医学报. 2008(07)
[4]从人外毛根鞘细胞分离获取黑素母细胞[J]. 卢涛,金岩,刘源,雷娟,刘晓亮. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(37)
[5]乌骨绵羊和黑色素的研究进展[J]. 李文,邓卫东,毛华明. 家畜生态学报. 2007(03)
[6]外毛根鞘无色素性黑素细胞的免疫组化研究[J]. 谭城,朱文元,鲁严. 中国皮肤性病学杂志. 2006(02)
[7]MC1R是控制鸡黑色素形成的候选主效基因[J]. 杨永升,邓学梅,李宁,傅衍,朱睦元,吴常信. 生物化学与生物物理进展. 2004(06)
[8]毛囊外根鞘NKI/beteb和HMB-45免疫组化及胰酶消化后细胞的电镜观察[J]. 张汝芝,朱文元,马慧军,王大光. 临床皮肤科杂志. 2003(10)
本文编号：3585442
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