低氧条件下成年牦牛肾间质成纤维样细胞中EPO的适应性调控研究
发布时间：2022-01-13 11:33
哺乳动物长期暴露于高原环境中,习服不良,易在低氧刺激下产生以红细胞增多症为代表的高原病,这也是常驻高原人群中最为常见的慢性疾病。世居高原的牦牛（Bos grunniens）是高海拔低氧环境中的特有牛种,主要生活于海拔3000-5000米之间,其对低氧环境适应良好,虽有红细胞数量随着海拔升高而升高的生理性变化,但未出现红细胞增多症这一代表性高原疾病。在人和小鼠的研究中已发现,促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）作为红细胞生成调控的核心因子,在常氧和低氧条件下均受低氧诱导因子-2α（hypoxia induced factor-2α,HIF-2α）的调控;且其在造血功能之外,在低氧刺激下还表现出多种组织保护作用。但截止目前,牦牛中EPO的表达特征及其调控机制还未见研究和报道。因此,本试验首先对成年牦牛心脏、肝脏、肺脏和肾脏中EPO、HIF-1α和HIF-2α的表达情况进行检测,而后,以其主要生成器官——肾脏为核心,对其EPO生成细胞及表达调控进行研究,具体结果如下:1.试验使用qRT-PCR和免疫组织化学方法,对成年牦牛心脏、肝脏、肺脏和肾脏中EPO、HIF-1α和HIF...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EPO，HIF-1α和HIF-2αmRNA在各组织中的表达
低氧条件下成年牦牛肾间质成纤维样细胞中EPO的适应性调控研究33图1-2成年牦牛心脏中EPO，HIF-1α和HIF-2α的免疫组织化学染色。阳性表达显示为棕色。（A-C）EPO在心脏中的定位表达，可见其心肌细胞、血管内皮细胞浦肯野纤维中均呈阳性表达，图A和B原始放大倍率：×400，图C原始放大倍率：×100。（D-F）HIF-1α在心脏中的定位表达，其表达位置与EPO一致，图D和E原始放大倍率：×400，图F原始放大倍率：×100。（G-H）HIF-2α在心脏中的定位表达，其表达位置与HIF-1α的表达一致，图G原始放大倍率：×400，图F原始放大倍率：×100。（I）空白对照，原始放大倍率：×400。黑色箭头：血管内皮细胞；三角形：浦肯野纤维。Figure1-2ImmunohistochemicalstainingofEPO,HIF-1α,andHIF-2αinadultyakheart.Positiveexpressionisshownasbrown.(A-C)LocalizationofEPOintheheart,itispositiveincardiomyocytecells,vascularendothelialcellsandpurkinjecells;originalmagnificationofAandB:×400,originalmagnificationofC:×100.(D-F)LocalizationofHIF-1αinthekidney,itsexpressionisthesameasthatofEPO;originalmagnificationofDandE:×400,originalmagnificationofF:×100.(G-H)LocalizationofHIF-2αinthekidney,itsexpressionisconsistentwithHIF-1α;originalmagnificationofG:×400,originalmagnificationofH:×100.(I)Negtivecontrol,originalmagnification:×400.Blackarrow:vascularendothelialcells,blackarrowhead:purkinjecells.2.3成年牦牛肝脏内EPO、HIF-1α与HIF-2α的表达免疫组织化学结果显示，在健康牦牛的肝脏中，EPO虽广泛表达于肝细胞
甘肃农业大学2020届博士学位论文34中，但表达较弱，其在小叶间胆管中可见明显的阳性表达，在动、静脉血管内皮细胞中的表达呈阴性（图1-3，A-C）。HIF-1α（图1-3，D-F）和HIF-2α（图1-3，G-F）在肝脏内的表达位置与EPO的表达情况一致，但HIF-1α和HIF-2α的表达强度显著高于EPO，阴性对照如图1-3，I所示。图1-3成年牦牛肝脏中EPO，HIF-1α和HIF-2α的免疫组织化学染色。阳性表达显示为棕色。（A-C）EPO在肝脏中的表达，可见其在肝细胞和小叶间胆管上皮细胞的表达呈阳性，在血管内皮细胞不表达；原始放大倍率：×400。（D-F）HIF-1α在肝脏中的定位表达，在肝细胞和小叶间胆管上皮细胞中的表达呈阳性，血管内皮细胞中的表达呈阴性；原始放大倍率：×400。（G-H）HIF-2α在肝脏中的定位表达，其表达位置与HIF-1α一致，表达强度相对较弱；原始放大倍率：×400。（I）空白对照，原始放大倍率：×200。黑色箭头：小叶间胆管上皮细胞；红色箭头：血管内皮细胞。Figure1-3ImmunohistochemicalstainingofEPO,HIF-1α,andHIF-2αinadultyakliver.Positiveexpressionisshownasbrown.(A-C)LocalizationofEPOintheliver,itispositiveinhepatocyteandinterlobularbileductepithelialcells,negtiveinvascularendothelialcells;originalmagnification:×400.(D-F)LocalizationofHIF-1αintheliver,itsexpressioncouldbedetectedinhepatocyteandinterlobularbileductepithelialcells,andnegtiveinvascularendothelialcells;originalmagnification:×400.(G-H)LocalizationofHIF-2αintheliver,itsexpressionwasconsistentwithHIF-1α,butrelativelyweak;originalmagnification:×400.(I)Negtivecontrol,
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠近端肾小管上皮细胞原代培养及鉴定[J]. 王梨名,陈佳,陈客宏,蔡明玉,汪晓月,何娅妮. 生理学报. 2018(04)
[2]成年牦牛与黄牛肺内肺动脉结构组织和形态学比较分析[J]. 周金星,余四九,何俊峰,崔燕. 中国兽医学报. 2015(11)
[3]HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响[J]. 黄灵娟,赵建强,马艳萍. 山西医科大学学报. 2014(12)
[4]RNA干扰的研究进展[J]. 何洁凝,田生礼. 生命科学研究. 2014(03)
[5]牦牛肺脏高原适应性的结构研究[J]. 陈秋生,冯霞,姜生成. 中国农业科学. 2006(10)
博士论文
[1]高原习服及习服不良过程中基因表达特征及其病理生理学意义研究[D]. 刘宝.第三军医大学 2017
本文编号：3586343
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EPO，HIF-1α和HIF-2αmRNA在各组织中的表达
低氧条件下成年牦牛肾间质成纤维样细胞中EPO的适应性调控研究33图1-2成年牦牛心脏中EPO，HIF-1α和HIF-2α的免疫组织化学染色。阳性表达显示为棕色。（A-C）EPO在心脏中的定位表达，可见其心肌细胞、血管内皮细胞浦肯野纤维中均呈阳性表达，图A和B原始放大倍率：×400，图C原始放大倍率：×100。（D-F）HIF-1α在心脏中的定位表达，其表达位置与EPO一致，图D和E原始放大倍率：×400，图F原始放大倍率：×100。（G-H）HIF-2α在心脏中的定位表达，其表达位置与HIF-1α的表达一致，图G原始放大倍率：×400，图F原始放大倍率：×100。（I）空白对照，原始放大倍率：×400。黑色箭头：血管内皮细胞；三角形：浦肯野纤维。Figure1-2ImmunohistochemicalstainingofEPO,HIF-1α,andHIF-2αinadultyakheart.Positiveexpressionisshownasbrown.(A-C)LocalizationofEPOintheheart,itispositiveincardiomyocytecells,vascularendothelialcellsandpurkinjecells;originalmagnificationofAandB:×400,originalmagnificationofC:×100.(D-F)LocalizationofHIF-1αinthekidney,itsexpressionisthesameasthatofEPO;originalmagnificationofDandE:×400,originalmagnificationofF:×100.(G-H)LocalizationofHIF-2αinthekidney,itsexpressionisconsistentwithHIF-1α;originalmagnificationofG:×400,originalmagnificationofH:×100.(I)Negtivecontrol,originalmagnification:×400.Blackarrow:vascularendothelialcells,blackarrowhead:purkinjecells.2.3成年牦牛肝脏内EPO、HIF-1α与HIF-2α的表达免疫组织化学结果显示，在健康牦牛的肝脏中，EPO虽广泛表达于肝细胞
甘肃农业大学2020届博士学位论文34中，但表达较弱，其在小叶间胆管中可见明显的阳性表达，在动、静脉血管内皮细胞中的表达呈阴性（图1-3，A-C）。HIF-1α（图1-3，D-F）和HIF-2α（图1-3，G-F）在肝脏内的表达位置与EPO的表达情况一致，但HIF-1α和HIF-2α的表达强度显著高于EPO，阴性对照如图1-3，I所示。图1-3成年牦牛肝脏中EPO，HIF-1α和HIF-2α的免疫组织化学染色。阳性表达显示为棕色。（A-C）EPO在肝脏中的表达，可见其在肝细胞和小叶间胆管上皮细胞的表达呈阳性，在血管内皮细胞不表达；原始放大倍率：×400。（D-F）HIF-1α在肝脏中的定位表达，在肝细胞和小叶间胆管上皮细胞中的表达呈阳性，血管内皮细胞中的表达呈阴性；原始放大倍率：×400。（G-H）HIF-2α在肝脏中的定位表达，其表达位置与HIF-1α一致，表达强度相对较弱；原始放大倍率：×400。（I）空白对照，原始放大倍率：×200。黑色箭头：小叶间胆管上皮细胞；红色箭头：血管内皮细胞。Figure1-3ImmunohistochemicalstainingofEPO,HIF-1α,andHIF-2αinadultyakliver.Positiveexpressionisshownasbrown.(A-C)LocalizationofEPOintheliver,itispositiveinhepatocyteandinterlobularbileductepithelialcells,negtiveinvascularendothelialcells;originalmagnification:×400.(D-F)LocalizationofHIF-1αintheliver,itsexpressioncouldbedetectedinhepatocyteandinterlobularbileductepithelialcells,andnegtiveinvascularendothelialcells;originalmagnification:×400.(G-H)LocalizationofHIF-2αintheliver,itsexpressionwasconsistentwithHIF-1α,butrelativelyweak;originalmagnification:×400.(I)Negtivecontrol,
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠近端肾小管上皮细胞原代培养及鉴定[J]. 王梨名,陈佳,陈客宏,蔡明玉,汪晓月,何娅妮. 生理学报. 2018(04)
[2]成年牦牛与黄牛肺内肺动脉结构组织和形态学比较分析[J]. 周金星,余四九,何俊峰,崔燕. 中国兽医学报. 2015(11)
[3]HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响[J]. 黄灵娟,赵建强,马艳萍. 山西医科大学学报. 2014(12)
[4]RNA干扰的研究进展[J]. 何洁凝,田生礼. 生命科学研究. 2014(03)
[5]牦牛肺脏高原适应性的结构研究[J]. 陈秋生,冯霞,姜生成. 中国农业科学. 2006(10)
博士论文
[1]高原习服及习服不良过程中基因表达特征及其病理生理学意义研究[D]. 刘宝.第三军医大学 2017
本文编号：3586343
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