细粒棘球绦虫EgM123基因重组狂犬病病毒SRV 9 株基因组全长cDNA的构建

发布时间：2022-01-13 13:46

　　试验旨在通过反向遗传学技术构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV₉疫苗株,为中国农牧区的狂犬病和包虫病的有效防控提供技术手段。本试验参照狂犬病病毒SRV₉株全基因组序列,利用基因合成技术分别合成狂犬病病毒的结构蛋白N、P、L基因,以及N-P-M基因融合片段和狂犬病病毒G基因、细粒棘球绦虫EgM123基因与增强型绿色荧光蛋白eGFP融合片段基因,通过载体酶切插入连接方法,依次将狂犬病病毒L基因、N-P-M基因融合片段和G+EgM123+eGFP基因融合片段重组于pcDNA3.1（-）表达载体上,构建EgM123基因重组狂犬病病毒SRV₉全长cDNA。将合成的基因分别构建于pcDNA3.1（-）表达载体,经转化、质粒酶切、基因测序鉴定结果表明,狂犬病病毒N、P、L、N+P+M和G+EgM123+eGFP基因片段长度分别为1 365、1 107、6 471、3 160和3 256 bp;EgM123基因重组狂犬病病毒全长cDNA片段长度为12 465 bp,各基因片段测序结果为100%。本试验成功构建了EgM123基因重组狂... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(10)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

狂犬病病毒SRV9株N基因PCR鉴定

狂犬病病毒SRV9株N基因重组质粒酶切鉴定

通过基因合成狂犬病SRV9病毒P基因序列1 107 bp,并在P基因序列两端加入XhoⅠ/EcoR Ⅰ酶切位点,经菌液PCR方法和XhoⅠ/EcoRⅠ双酶切方法,分别对基因合成狂犬病病毒SRV9株pcDNA3.1-P重组质粒进行序列鉴定。菌液PCR基因扩增结果和双酶切结果均获得1 107 bp目的基因条带(图3、4),条带大小与预期相符。所鉴定的重组质粒经基因序列测序,基因相似率为100%。图4 狂犬病病毒SRV9株P基因质粒酶切鉴定

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3586546