鸭Mx蛋白单克隆抗体的制备及DHAV-3感染鸭胚Mx蛋白表达模式的分析
发布时间：2022-01-15 21:47
Mx蛋白是具有抗病毒活性的蛋白,在机体内由干扰素诱导产生,但目前鸭Mx蛋白抗病毒的具体机制尚未确定,制备可用于检测鸭Mx蛋白的单克隆抗体,有助于阐明鸭Mx蛋白的结构及其在抗病毒感染中的作用,为深入研究水禽Mx蛋白功能提供必要的物质基础。在分析本实验室已克隆的鸭Mx基因编码氨基酸的同源性及其抗原性的基础上,以实验室保存的重组质粒pMD19-T Simple Mx为模板,通过PCR扩增得到鸭Mx-A（1-300 bp）、Mx-B（1798-2163 bp）、Mx-C（418-939 bp）、Mx-CDS目的基因,并将鸭Mx的三段截短基因同时亚克隆至pET-30a（+）和pET-32a（+）原核表达载体中,构建原核重组表达载体,经重组蛋白的诱导表达,获得重组鸭Mx截短蛋白rDupET-30a-Mx-A、rDupET-30a-Mx-B、rDupET-30a-Mx-C、rDupET-32a-Mx-A、rDupET-32a-Mx-B、rDupET-32a-Mx-C。与此同时构建鸭Mx基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Mx-CDS。以rDupET-30a-Mx-A、rDupET-30a-Mx-B、...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GTPase结构功能区示意图(引自OttoHaller,2007)
23间 Mx-A 序列相似性分析；B: 不同物种间 Mx-B 序列相似性分析；C: 不同物种间 Mx-C 序列相似性分析 sequence similarity analysis among different species; B: Mx-B sequence similarity analysis amongdifferent species; C: Mx-C sequence similarity analysis among different species图 3-1 物种间 Mx-A、Mx-B、Mx-C 序列相似性分析-1 Similarity of acids sequences of Mx-A, Mx-B and Mx-C fragments among differentspecies
3-6 Determination of optimal responsed condition by I-ELISA for detection of arDupET-32a-Mx-C McAbs稀释浓度 作用时间 工作温度 25ng 过夜 4℃液 碳酸盐缓冲液(pH 9.6)液 5%脱脂乳-PBST 2h 37℃ 1:2000 1h 37℃ 1:5000 1h 37℃液 TMB 10min 室温液 1M H2SO45min 室温交瘤细胞株的鉴定交瘤细胞株染色体计数分析 细胞的染色体数正常情况下为 55-65 条，小鼠脾细胞染色体数正常情况下为 的 9 株分泌抗鸭 Mx 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，它们的染色体数目在 90这 9 株细胞是小鼠脾细胞和 SP2/0 成功融合的杂交瘤细胞，如图 3-8。
【参考文献】：
期刊论文
[1]东串猪Mx1基因第14外显子多态性及组织表达谱分析[J]. 吴嘉韵,朱恩昊,王海飞,吴圣龙,包文斌. 中国畜牧兽医. 2018(02)
[2]鸽MX基因的克隆及序列分析[J]. 罗婷,李国勤,陈晓燕,温积辉,陶争荣,黄小红,卢立志. 中国畜牧杂志. 2018(01)
[3]不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异[J]. 王建琳,曹志伟,王冬冬,尹燕博. 畜牧兽医学报. 2017(05)
[4]多种动物Mx基因的研究进展[J]. 杨志远,段纲,代飞燕,项勋,常华. 黑龙江畜牧兽医. 2016(19)
[5]禽类几种先天抗病毒免疫因子的研究进展[J]. 曾妙,陈舜,汪铭书,程安春. 病毒学报. 2016(05)
[6]抗病毒蛋白Mx抗病毒机制研究进展[J]. 陶换,胡善明,孙浩,李家俊,余燕,马金友. 河南科技学院学报(自然科学版). 2016(04)
[7]鸭干扰素研究进展与应用[J]. 高佩,黎玉莲,李亚玲,向斌,任涛. 养禽与禽病防治. 2016(02)
[8]1型鸭甲肝病毒VP3蛋白的抗血清中和活性分析及B细胞表位鉴定[J]. 沈友林,汪铭书,程安春,贾仁勇,朱德康,陈舜,刘马峰,刘菲,杨乔,孙昆峰,陈孝跃. 畜牧兽医学报. 2016(01)
[9]梅山猪Mx1基因第14外显子多态性及其与繁殖性能的关联分析[J]. 戴超辉,戴开宇,宗秋芳,包文斌,吴圣龙. 中国畜牧兽医. 2015(12)
[10]猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制[J]. 王鹏,郑兆鑫,刘明秋. 中国生物工程杂志. 2015(03)
硕士论文
[1]DHAV-1和DHAV-3感染SPF绍鸭胚Mx基因表达差异的研究[D]. 崔嘉琦.东北农业大学 2017
[2]DHAV-3山东分离株P1基因序列分析及单克隆抗体的制备[D]. 夏琳琳.山东农业大学 2015
本文编号：3591376
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GTPase结构功能区示意图(引自OttoHaller,2007)
23间 Mx-A 序列相似性分析；B: 不同物种间 Mx-B 序列相似性分析；C: 不同物种间 Mx-C 序列相似性分析 sequence similarity analysis among different species; B: Mx-B sequence similarity analysis amongdifferent species; C: Mx-C sequence similarity analysis among different species图 3-1 物种间 Mx-A、Mx-B、Mx-C 序列相似性分析-1 Similarity of acids sequences of Mx-A, Mx-B and Mx-C fragments among differentspecies
3-6 Determination of optimal responsed condition by I-ELISA for detection of arDupET-32a-Mx-C McAbs稀释浓度 作用时间 工作温度 25ng 过夜 4℃液 碳酸盐缓冲液(pH 9.6)液 5%脱脂乳-PBST 2h 37℃ 1:2000 1h 37℃ 1:5000 1h 37℃液 TMB 10min 室温液 1M H2SO45min 室温交瘤细胞株的鉴定交瘤细胞株染色体计数分析 细胞的染色体数正常情况下为 55-65 条，小鼠脾细胞染色体数正常情况下为 的 9 株分泌抗鸭 Mx 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，它们的染色体数目在 90这 9 株细胞是小鼠脾细胞和 SP2/0 成功融合的杂交瘤细胞，如图 3-8。
【参考文献】：
期刊论文
[1]东串猪Mx1基因第14外显子多态性及组织表达谱分析[J]. 吴嘉韵,朱恩昊,王海飞,吴圣龙,包文斌. 中国畜牧兽医. 2018(02)
[2]鸽MX基因的克隆及序列分析[J]. 罗婷,李国勤,陈晓燕,温积辉,陶争荣,黄小红,卢立志. 中国畜牧杂志. 2018(01)
[3]不同致病性H9N2亚型禽流感病毒诱导鸡TLR-7和Mx基因mRNA转录水平的差异[J]. 王建琳,曹志伟,王冬冬,尹燕博. 畜牧兽医学报. 2017(05)
[4]多种动物Mx基因的研究进展[J]. 杨志远,段纲,代飞燕,项勋,常华. 黑龙江畜牧兽医. 2016(19)
[5]禽类几种先天抗病毒免疫因子的研究进展[J]. 曾妙,陈舜,汪铭书,程安春. 病毒学报. 2016(05)
[6]抗病毒蛋白Mx抗病毒机制研究进展[J]. 陶换,胡善明,孙浩,李家俊,余燕,马金友. 河南科技学院学报(自然科学版). 2016(04)
[7]鸭干扰素研究进展与应用[J]. 高佩,黎玉莲,李亚玲,向斌,任涛. 养禽与禽病防治. 2016(02)
[8]1型鸭甲肝病毒VP3蛋白的抗血清中和活性分析及B细胞表位鉴定[J]. 沈友林,汪铭书,程安春,贾仁勇,朱德康,陈舜,刘马峰,刘菲,杨乔,孙昆峰,陈孝跃. 畜牧兽医学报. 2016(01)
[9]梅山猪Mx1基因第14外显子多态性及其与繁殖性能的关联分析[J]. 戴超辉,戴开宇,宗秋芳,包文斌,吴圣龙. 中国畜牧兽医. 2015(12)
[10]猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制[J]. 王鹏,郑兆鑫,刘明秋. 中国生物工程杂志. 2015(03)
硕士论文
[1]DHAV-1和DHAV-3感染SPF绍鸭胚Mx基因表达差异的研究[D]. 崔嘉琦.东北农业大学 2017
[2]DHAV-3山东分离株P1基因序列分析及单克隆抗体的制备[D]. 夏琳琳.山东农业大学 2015
本文编号：3591376
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3591376.html
