山羊源金葡菌的流行及其TSST-1诱导NLRP3炎症小体的激活
发布时间：2022-01-17 03:31
金黄色葡萄球菌是一种主要定植在人和动物皮肤表面、鼻咽部的革兰氏阳性胞外菌,感染后会引起人和动物的多种疾病,如脓皮症,败血症,乳房炎,关节炎等,严重威胁公共卫生安全。TSST-1是金黄色葡萄球菌的一种重要的毒力因子,属于超抗原毒素家族,在金黄色葡萄球菌致病机制中发挥着重要的作用。TSST-1具有A、B两个结构域,同其他超抗原毒素一样,可以直接通过抗原递呈细胞上的MHC II类分子,与Toll样受体分子的Vβ区结合,从而激活T细胞,引起大量炎性细胞增殖和炎性因子的产生。已有研究表明,金黄色葡萄球菌可以通过激活天然免疫模式受体中的Toll样受体和NOD样受体促进前炎细胞因子、抗炎细胞因子以及趋化因子的产生进而引发机体炎症反应,但是目前暂无关于TSST-1与宿主细胞炎症反应相关的研究。本试验在对重庆部分地区山羊鼻腔中分离到的金黄色葡萄球菌进行基因分型发现,tst1基因携带率较高。基于此我们原核表达纯化了重组TSST-1毒素,用TSST-1刺激小鼠腹腔巨噬细胞后,利用荧光定量RT-PCR,ELISA和Western Blot等技术,研究TSST-1诱导巨噬细胞炎症反应及其相关机制,试验结果如下:...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
金葡菌超抗原毒素SEA、SEB、TSS-1三维结构示意图
西南大学硕士学位论文6分钟，而SAgs即使在100℃条件下煮30分钟，仍然能保持它的免疫活性和生物活性，完全失去活性也是需要在218-248℃下至少煮30分钟[51]。SAgs的作用机制最早由BernhardFleischer和HubertSchrezenmeier于1988年提出。据悉，SAgs可以不经过抗原提呈细胞（Antigenpresentingcells，APC）的处理，直接以完整蛋白形式与APC膜上主要组织相容性复合体II类分子（MHCII）结合，通过MHCII分子与T细胞表面受体Vβ区直接交联[52]（图1.2）。大量研究表明，SAgs在极低浓度（1~10ng/mL）下即可刺激机体产生强烈的初次免疫应答反应，激活大量T淋巴细胞（是普通抗原的103~105倍）[53]。T细胞产生大量的前炎细胞因子（IL-2、IFN-γ和TNFα），从而导致一系列症状的表现，如高热、皮疹、脱皮、呕吐、腹泻、低血压，并经常会导致多器官功能衰竭[54]。在细胞因子风暴结束后，T细胞不再受到持续刺激，增殖停止，IL-2分泌减少，细胞逐渐死亡。这也表明了SAgs是一种强效免疫原，可诱导和中和抗体反应[55]。图1.2正常抗原（B）与超抗原（C）与TCR，CD28，APC和MHCII结合示意图Fig.1.2Diagramofnormalantigen(B)andsuperantigen(C)bindtoTCR,CD28andmajorMHCIIofAPC1.2.3金葡菌超抗原毒素TSST-1研究进展在金黄色葡萄球菌与宿主相互对抗多年中，金葡菌毒力基因和某些疾病症状之间已经建立了很强的相关性。众所周知的中毒性休克综合症（toxicshocksyndrome，TSS）就与金葡菌的一种超抗原毒素，TSST-1，密切相关。TSS是一种起病急骤、进展迅速的严重感染性疾病，以发热、皮疹、病后脱皮和脱屑、低血压三个以上器官功能受损为特征，并伴有较高死亡率。1978年，Todd首次报道了由
第3章重庆地区山羊源性金黄色葡萄球菌流行及耐药情况193.3试验结果3.3.1山羊源性金黄色葡萄球菌分离情况本次调查从重庆市大足、永川、石柱三个地区的养殖场中分别采集了87、60、20份山羊鼻拭子。在共计167个山羊鼻拭子样本中分离出45株金黄色葡萄球菌，总分离率为26.9%（45/167）。大足地区的金葡菌分离率最高，为29.8%（26/87），其次是永川25%（15/60）和石柱20%（4/20）。图3-1金黄色葡萄球菌PCR鉴定图。M:marker；1:ATCC25923；2-24:临床分离菌株Fig.3-1DetectionofS.aureusspecificfemBgene.M:marker;1:ATCC25923;2-24:isolates.3.3.2分离株药物敏感性试验结果45株金黄色葡萄球菌药物敏感性试验结果见表3-4。45株金黄色葡萄球菌对苯唑西林、庆大霉素、万古霉素、氯霉素、利福平和呋喃妥因完全敏感。对青霉素的耐药率最高，达71.11%，其次是复方新诺明，31.11%。根据耐药谱结果显示，有一株菌对青霉素、红霉素、四环素、环丙沙星、复方新诺明和克林霉素呈现出多重耐药（见图3-4），该多重耐药菌株来源于永川。表3-4金黄色葡萄球菌分离株的药敏试验结果Table3-4ResultsofdrugsensitivitytestforS.aureus(n=45)抗生素名称及缩写菌株数量耐药率或敏感率耐药中敏敏感耐药率（%）敏感率（%）青霉素（PEN）3201371.1128.89苯唑西林（OXS）00450100红霉素（ERY）17372.2282.22庆大霉素（GEN）00450100万古霉素（VAN）00450100四环素（TET）21424.4493.33氯霉素（CHL）00450100环丙沙（CIP）10442.2297.78复方新诺明（SXT）1452631.1157.78531bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞焦亡的机制和功能[J]. 董娜,邵峰. 中国科学:生命科学. 2019(12)
[2]高糖对牛视网膜微血管周细胞P2X7及其下游活性氧簇、ATP产生和IL-6释放的影响[J]. 刘琦,于珮. 临床合理用药杂志. 2017(22)
[3]金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素临床应用研究进展[J]. 胡风庆,彭雪. 微生物学杂志. 2016(05)
[4]金黄色葡萄球菌肠毒素在食源性微生物中的研究进展[J]. 徐振波,刘晓晨,李琳,李冰. 现代食品科技. 2013(09)
[5]血浆凝固酶试验直接鉴定血培养阳性金黄色葡萄球菌[J]. 黄黎俐,杨青,骆骥才,滕敏. 中国卫生检验杂志. 2011(12)
[6]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的研究进展[J]. 王凤玲,侯英荣,冯秀河. 中国感染与化疗杂志. 2010(01)
[7]金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布[J]. 张严峻,张俊彦,梅玲玲,王志刚,朱敏,王赞信. 中国卫生检验杂志. 2005(06)
[8]谷氨酸和ATP对新生大鼠脑星形胶质细胞IL-6合成的影响[J]. 邬力祥,曹兆丰,朱新裘,刘发益,周晓燕. 湖南医科大学学报. 1997(02)
博士论文
[1]奶山羊隐性乳腺炎的流行病学调查及S.aureus感染小鼠乳腺后Th细胞免疫应答机制研究[D]. 赵燕清.西北农林科技大学 2015
硕士论文
[1]AraC家族转录调节蛋白Rsp对金黄色葡萄球菌毒力的调节及机制[D]. 李天铭.复旦大学 2014
[2]奶牛乳腺炎主要病原菌快速诊断及金葡萄α溶血素的原核表达[D]. 张善瑞.山东农业大学 2007
本文编号：3593959
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
金葡菌超抗原毒素SEA、SEB、TSS-1三维结构示意图
西南大学硕士学位论文6分钟，而SAgs即使在100℃条件下煮30分钟，仍然能保持它的免疫活性和生物活性，完全失去活性也是需要在218-248℃下至少煮30分钟[51]。SAgs的作用机制最早由BernhardFleischer和HubertSchrezenmeier于1988年提出。据悉，SAgs可以不经过抗原提呈细胞（Antigenpresentingcells，APC）的处理，直接以完整蛋白形式与APC膜上主要组织相容性复合体II类分子（MHCII）结合，通过MHCII分子与T细胞表面受体Vβ区直接交联[52]（图1.2）。大量研究表明，SAgs在极低浓度（1~10ng/mL）下即可刺激机体产生强烈的初次免疫应答反应，激活大量T淋巴细胞（是普通抗原的103~105倍）[53]。T细胞产生大量的前炎细胞因子（IL-2、IFN-γ和TNFα），从而导致一系列症状的表现，如高热、皮疹、脱皮、呕吐、腹泻、低血压，并经常会导致多器官功能衰竭[54]。在细胞因子风暴结束后，T细胞不再受到持续刺激，增殖停止，IL-2分泌减少，细胞逐渐死亡。这也表明了SAgs是一种强效免疫原，可诱导和中和抗体反应[55]。图1.2正常抗原（B）与超抗原（C）与TCR，CD28，APC和MHCII结合示意图Fig.1.2Diagramofnormalantigen(B)andsuperantigen(C)bindtoTCR,CD28andmajorMHCIIofAPC1.2.3金葡菌超抗原毒素TSST-1研究进展在金黄色葡萄球菌与宿主相互对抗多年中，金葡菌毒力基因和某些疾病症状之间已经建立了很强的相关性。众所周知的中毒性休克综合症（toxicshocksyndrome，TSS）就与金葡菌的一种超抗原毒素，TSST-1，密切相关。TSS是一种起病急骤、进展迅速的严重感染性疾病，以发热、皮疹、病后脱皮和脱屑、低血压三个以上器官功能受损为特征，并伴有较高死亡率。1978年，Todd首次报道了由
第3章重庆地区山羊源性金黄色葡萄球菌流行及耐药情况193.3试验结果3.3.1山羊源性金黄色葡萄球菌分离情况本次调查从重庆市大足、永川、石柱三个地区的养殖场中分别采集了87、60、20份山羊鼻拭子。在共计167个山羊鼻拭子样本中分离出45株金黄色葡萄球菌，总分离率为26.9%（45/167）。大足地区的金葡菌分离率最高，为29.8%（26/87），其次是永川25%（15/60）和石柱20%（4/20）。图3-1金黄色葡萄球菌PCR鉴定图。M:marker；1:ATCC25923；2-24:临床分离菌株Fig.3-1DetectionofS.aureusspecificfemBgene.M:marker;1:ATCC25923;2-24:isolates.3.3.2分离株药物敏感性试验结果45株金黄色葡萄球菌药物敏感性试验结果见表3-4。45株金黄色葡萄球菌对苯唑西林、庆大霉素、万古霉素、氯霉素、利福平和呋喃妥因完全敏感。对青霉素的耐药率最高，达71.11%，其次是复方新诺明，31.11%。根据耐药谱结果显示，有一株菌对青霉素、红霉素、四环素、环丙沙星、复方新诺明和克林霉素呈现出多重耐药（见图3-4），该多重耐药菌株来源于永川。表3-4金黄色葡萄球菌分离株的药敏试验结果Table3-4ResultsofdrugsensitivitytestforS.aureus(n=45)抗生素名称及缩写菌株数量耐药率或敏感率耐药中敏敏感耐药率（%）敏感率（%）青霉素（PEN）3201371.1128.89苯唑西林（OXS）00450100红霉素（ERY）17372.2282.22庆大霉素（GEN）00450100万古霉素（VAN）00450100四环素（TET）21424.4493.33氯霉素（CHL）00450100环丙沙（CIP）10442.2297.78复方新诺明（SXT）1452631.1157.78531bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞焦亡的机制和功能[J]. 董娜,邵峰. 中国科学:生命科学. 2019(12)
[2]高糖对牛视网膜微血管周细胞P2X7及其下游活性氧簇、ATP产生和IL-6释放的影响[J]. 刘琦,于珮. 临床合理用药杂志. 2017(22)
[3]金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素临床应用研究进展[J]. 胡风庆,彭雪. 微生物学杂志. 2016(05)
[4]金黄色葡萄球菌肠毒素在食源性微生物中的研究进展[J]. 徐振波,刘晓晨,李琳,李冰. 现代食品科技. 2013(09)
[5]血浆凝固酶试验直接鉴定血培养阳性金黄色葡萄球菌[J]. 黄黎俐,杨青,骆骥才,滕敏. 中国卫生检验杂志. 2011(12)
[6]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的研究进展[J]. 王凤玲,侯英荣,冯秀河. 中国感染与化疗杂志. 2010(01)
[7]金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布[J]. 张严峻,张俊彦,梅玲玲,王志刚,朱敏,王赞信. 中国卫生检验杂志. 2005(06)
[8]谷氨酸和ATP对新生大鼠脑星形胶质细胞IL-6合成的影响[J]. 邬力祥,曹兆丰,朱新裘,刘发益,周晓燕. 湖南医科大学学报. 1997(02)
博士论文
[1]奶山羊隐性乳腺炎的流行病学调查及S.aureus感染小鼠乳腺后Th细胞免疫应答机制研究[D]. 赵燕清.西北农林科技大学 2015
硕士论文
[1]AraC家族转录调节蛋白Rsp对金黄色葡萄球菌毒力的调节及机制[D]. 李天铭.复旦大学 2014
[2]奶牛乳腺炎主要病原菌快速诊断及金葡萄α溶血素的原核表达[D]. 张善瑞.山东农业大学 2007
本文编号：3593959
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