一株羊口疮病毒的分离鉴定及绵羊睾丸细胞永生化细胞系的建立
发布时间：2022-01-19 16:59
羊口疮病毒（orf virus,ORFV）又称接触传染性脓疱性口炎（contagious secthyma）病毒,属于痘病毒科副痘病毒属,主要可感染绵羊和山羊,可引起羔羊的口唇黏膜和肛门部位形成水疱、脓疱和痂皮等,发病率高死亡率高。2016年12月,安徽肥西某羊场暴发疑似羊口疮（Orf）疫情,采集羊病料后,利用原代绵羊睾丸细胞（Ovis aries testis cell）对其进行病毒的分离增殖培养,并对病毒的增殖特性进行初步鉴定。此外,对20132017年间流行于安徽省的10株羊口疮病毒的部分功能基因进行了序列分析。为了建立可稳定增殖羊口疮病毒的传代细胞系,利用慢病毒包装系统将人端粒酶逆转录酶亚基（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）整合入绵羊睾丸原代细胞的染色体中,借助于嘌呤霉素的压力,成功筛选出永生化的绵羊睾丸细胞系,为后续羊口疮病毒的研究奠定了基础。具体内容如下所示。1、羊口疮病毒AH-FX16株的分离鉴定及生物学特性研究:首先,分离和鉴定了一株羊口疮病毒,该发病羔羊出现口腔黏膜、舌头、嘴和唇的周围皮肤...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ORFVVIR基因的PCR扩增Fig.2-2AmplicationofORFVVIRgenebyPCR
2 结果2.1 羊口疮病毒的分离及鉴定2.1.1 原代绵羊睾丸细胞的制备绵羊睾丸细胞经胰酶消化传代培养，以 1/3 分瓶传代培养至第 10 代，细胞形态差异不明显，均呈纤维状或者梭形，生长速度仍是 2.5 d~3 d 长满。细胞传代一般 6 h 开始贴壁，36 h 至 60 h 是生长高峰期。1 代10 代
毒分离株的增殖培养及传代16 株感染 BHK-21 细胞、MDBK 细胞、Vero 细胞法检测出病毒核酸，结果如图 2-3，PCR 结果说明6 株的增殖培养。分离的原代绵羊睾丸细胞及其传毒增殖。ORFV初次感染绵羊睾丸细胞48 h就可观现脱落，细胞间距拉大。传代至第 5 代细胞毒感距变大、颗粒物增多的细胞病变情况。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
【参考文献】：
期刊论文
[1]江苏省羊口疮病毒的分离鉴定及B2L基因的遗传进化分析[J]. 王秋霞,朱相儒,易成功,秦涛,陈素娟,彭大新,夏同海. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[2]羊口疮病毒QD/2015株B2L基因克隆及生物信息学分析[J]. 李智,仲亮,张静,刘春羽,范俊豪,王海峰,牛云雷,张七斤. 中国动物检疫. 2017(03)
[3]SV40LT基因过表达慢病毒载体的构建与包装[J]. 游颖,沈欢欢,马雨楠,曾林. 实验动物科学. 2016(02)
[4]口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达[J]. 宫晓华,殷冬冬,王瑞,唐井玉,周晓雅,梅楠,张雪梅,兰梦蝶,陈鹏,王勇,王桂军. 中国兽医科学. 2016(02)
[5]细胞永生化机制及不同细胞永生化方法研究进展[J]. 黄今,杨融辉,马海英. 东南大学学报(医学版). 2015(05)
[6]我国1984-2014年羊口疮报道文献的统计分析[J]. 王晴楠,张凯照,宁章勇. 畜牧与兽医. 2015(09)
[7]Establishment of Immortalized Cow Mammary Epithelial Cells Expressing Both h TERT and SV40 T[J]. LI Qi-hui,TANG Mu-tao,WANG Xiu-de. Animal Husbandry and Feed Science. 2015(02)
[8]羊口疮病毒的分离与鉴定[J]. 庞方圆,高日明,李旭东,闫聪,李浩,王艳杰,张七斤. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[9]羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 孔汉金,张克山,刘永杰,尚佑军,刘湘涛,吴斌. 中国兽医科学. 2014(07)
[10]羊口疮病毒黑龙江省分离株的分离鉴定[J]. 于永忠,谭强,赵文博,包凯,崔玉东. 中国预防兽医学报. 2013(08)
硕士论文
[1]羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立[D]. 何建斌.西北农林科技大学 2017
[2]羊口疮抗体ELISA检测方法的建立及应用[D]. 李杰.西北农林科技大学 2013
本文编号：3597231
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ORFVVIR基因的PCR扩增Fig.2-2AmplicationofORFVVIRgenebyPCR
2 结果2.1 羊口疮病毒的分离及鉴定2.1.1 原代绵羊睾丸细胞的制备绵羊睾丸细胞经胰酶消化传代培养，以 1/3 分瓶传代培养至第 10 代，细胞形态差异不明显，均呈纤维状或者梭形，生长速度仍是 2.5 d~3 d 长满。细胞传代一般 6 h 开始贴壁，36 h 至 60 h 是生长高峰期。1 代10 代
毒分离株的增殖培养及传代16 株感染 BHK-21 细胞、MDBK 细胞、Vero 细胞法检测出病毒核酸，结果如图 2-3，PCR 结果说明6 株的增殖培养。分离的原代绵羊睾丸细胞及其传毒增殖。ORFV初次感染绵羊睾丸细胞48 h就可观现脱落，细胞间距拉大。传代至第 5 代细胞毒感距变大、颗粒物增多的细胞病变情况。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
【参考文献】：
期刊论文
[1]江苏省羊口疮病毒的分离鉴定及B2L基因的遗传进化分析[J]. 王秋霞,朱相儒,易成功,秦涛,陈素娟,彭大新,夏同海. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[2]羊口疮病毒QD/2015株B2L基因克隆及生物信息学分析[J]. 李智,仲亮,张静,刘春羽,范俊豪,王海峰,牛云雷,张七斤. 中国动物检疫. 2017(03)
[3]SV40LT基因过表达慢病毒载体的构建与包装[J]. 游颖,沈欢欢,马雨楠,曾林. 实验动物科学. 2016(02)
[4]口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达[J]. 宫晓华,殷冬冬,王瑞,唐井玉,周晓雅,梅楠,张雪梅,兰梦蝶,陈鹏,王勇,王桂军. 中国兽医科学. 2016(02)
[5]细胞永生化机制及不同细胞永生化方法研究进展[J]. 黄今,杨融辉,马海英. 东南大学学报(医学版). 2015(05)
[6]我国1984-2014年羊口疮报道文献的统计分析[J]. 王晴楠,张凯照,宁章勇. 畜牧与兽医. 2015(09)
[7]Establishment of Immortalized Cow Mammary Epithelial Cells Expressing Both h TERT and SV40 T[J]. LI Qi-hui,TANG Mu-tao,WANG Xiu-de. Animal Husbandry and Feed Science. 2015(02)
[8]羊口疮病毒的分离与鉴定[J]. 庞方圆,高日明,李旭东,闫聪,李浩,王艳杰,张七斤. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[9]羊口疮病毒B2L蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 孔汉金,张克山,刘永杰,尚佑军,刘湘涛,吴斌. 中国兽医科学. 2014(07)
[10]羊口疮病毒黑龙江省分离株的分离鉴定[J]. 于永忠,谭强,赵文博,包凯,崔玉东. 中国预防兽医学报. 2013(08)
硕士论文
[1]羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立[D]. 何建斌.西北农林科技大学 2017
[2]羊口疮抗体ELISA检测方法的建立及应用[D]. 李杰.西北农林科技大学 2013
本文编号：3597231
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