牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立
发布时间：2022-01-20 10:37
牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus IBRV）,主要引起牛的一种急性、热性、接触性传染病,主要表现出高热、呼吸困难、鼻炎和上呼吸道炎症,给养牛业带来极大的经济损失。牛传染性鼻气管炎在欧洲流行迅速很难控制。本试验的主要目的是以牛传染性鼻气管炎ge基因的原核表达产物为抗原建立IBRV抗体间接ELISA检测方法。通过用生物软件设计出IBRV gE基因引物序列,随后用PCR扩增基因,并构建了 Pcold-TF-gE原核表达体系。对重组蛋白gE诱导表达,以上清形式存在。经Westen blot检测证明重组表达产物能被IBRV标准阳性血清特异识别。以纯化鉴定成功的表达产物为抗原以1μg/mL包被酶标板,以HRP兔抗牛为二抗,TMB显色时间为15min。结果显示:其临界值为0.369,特异性试验表明:该方法与口蹄疫、牛病毒性腹泻、副结核、布氏杆菌、支原体等阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果表明:牛阳性血清稀释比例均达到1:4096表明具有很好的敏感性。通过对5份IBRV阳性血清进行板间和板内试验结果重复性较好。利用建立的gE-ELI...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 任亚初,楚会萌,程凯慧,解晓莉,张亮,孙阳阳,杨美,杨宏军,唐月新,刘文浩,李开荣. 中国预防兽医学报. 2019(10)
[2]牛传染性鼻气管炎病毒部分gB蛋白的原核表达及抗原性分析[J]. 何小丽,李凡飞,王文佳,张凯,程成,许立华. 江苏农业科学. 2019(17)
[3]牛传染性鼻气管炎的诊治[J]. 姜强. 畜牧兽医科技信息. 2019(06)
[4]牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立[J]. 张颖慧,岳华,汤承,黄建德. 中国预防兽医学报. 2019(06)
[5]牛疱疹病毒1型感染性疾病的分析诊断和治疗控制措施[J]. 李喆. 饲料博览. 2019(05)
[6]猪伪狂犬病病毒山东分离株gE和gD基因的克隆及序列分析[J]. 张玲玲,时建立,彭喆,徐胜男,郑书轩,吴晓燕,徐绍建,王金宝,李俊. 中国兽医学报. 2017(11)
[7]牛传染性鼻气管炎病毒gB和gE基因双重荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 徐娜,杨帆,雷宇,李平安,关平原. 中国预防兽医学报. 2017(07)
[8]我国牛传染性鼻气管炎的流行与防控现状[J]. 甘瑜萍,余祖琼,黄恒,曾繁泉,陆俊致. 黑龙江畜牧兽医. 2016(04)
[9]牛传染性鼻气管炎的流行与防控进展[J]. 李程,陈颖钰,索朗斯珠,郭爱珍. 中国奶牛. 2015(17)
[10]牛传染性鼻气管炎病毒gD基因截短表达及其抗血清制备[J]. 张辉,宋玲玲,杨宏军,王洪梅,武建明,候佩莉,何洪彬,王立群. 家畜生态学报. 2013(01)
博士论文
[1]IBR间接ELISA的建立及重组gE糖蛋白与单抗的研制[D]. 王海燕.吉林大学 2006
硕士论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立[D]. 宋林.东北农业大学 2015
[2]牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gD单抗制备及其抗原表位鉴定与双抗夹心ELISA的建立[D]. 周跃辉.中国农业科学院 2015
[3]牛传染性鼻气管炎TK/gE基因缺失重组病毒的研究[D]. 定明.华中农业大学 2010
[4]IBRV截短gB基因的表达及ELISA诊断方法的建立[D]. 李伟.吉林大学 2009
[5]牛疱疹病毒Ⅰ型重组抗原的制备及间接ELISA方法的建立[D]. 吴春涛.山东农业大学 2006
[6]牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的分段表达与间接ELISA诊断方法的建立及应用[D]. 李兆利.中国农业科学院 2006
本文编号：3598673
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图４?ｇＥ基因ＰＣＲ产物扩増结果??Ｆｉｇｕｒｅ?４?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｇＥ?ｇｅｎｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ??
１４?牛传染性鼻气管炎病毒ｇＥ蛋白原核表达及间接ＥＬ?ＩＳＡ检测方法的建立???２．３．２重组质粒的双酶切鉴定及测序结果??用聚合酶链式技术法对鉴定成功的重组质粒进行酶切及测序鉴定得到两个条??带分别是５０００ｂｐ和５００ｂｐ的片段。如图５及图６所示：??Ｍ?１??％ｚｔ??图５?ｇＥ重组质粒双酶切鉴定??Ｆｉｇｕｒｅ?５?Ｄｏｕｂｌｅ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇＥ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｌａｓｍｉｄ??Ｍ：?ＤＮＡ分子质量标准；１：?Ｐｃｏｌｄ－ＴＦ－ｇＥ??Ｍ：?Ｔｒａｎｓ５Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｐｃｏｌｄ－ＴＦ－ｇＥ??＾Ｄｏ?ｗｎｌｏａｄ?ＧｒｇＤ＾ｉｃ＜??Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ＩＤ：?Ｑｕｅ＾＿１２５９５Ｓ?Ｌｅｎｇｌｆｓ；?１２５７?ｆｉｕｍｂｅｒ?ｏｆ?Ｍａｔｃｈｅｓ：?１??Ｒｏｆｉｇｅ?１：?３６４?ｔｏ?８５７?Ｇｒａｐｈｒｃｓ??（ｉ?ｓ?＾ｘｐｅｃｉ?Ｉｄｅｕｔｉｔｉｅｓ?Ｇａｐｔ?５ｔ？?ｒ，？）ｄ??９１３?ｂｉｔｓ（４９４）?０．０?＾４＾９＾１００°，：］?０：４９－ｖＪ－ｃｊ?Ｐｌｕｓ＾Ｍｍｕｓ??Ｑｕｅｒｙ?１?ＡＣＣＣＣＧＯＧＣＴＣＧＧＣＴＴＣＧＧＴＣＧＡＣＡＣＧＧＴａＴＣＡＣＧ＾ＧＣＧＣＧＣＴＧ＾ＳＣＧＣＧＣＣＣＧＴＣＴＴＴ?６０??Ｑｕｅｒｙ?６１?ＣＴＣＣＣＡＧＧＧＣＣＣＧＣＧＧＣＧＣＧＣＣＣＧＧＡＣＧＴＧＣＧＣＧＣＣＧＴＴＣ３ＣＧ＜５ＣＴＧＧＡＧＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣｔ?１２０??Ｑｕｅｒｙ?１２１?ＧＧＣＧＣＣＴＧＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣ＾ＡＧＣＣＣＧＴＣＴＧＣＣＴＣＧＡＣＧＡＣＣＯＣＧＡＧＴＧＧＴＴＣ
?内蒙古农业大学硕士论文?＾５??图６?ｇＥ基因序列ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｂｌａｓｔ结果??Ｆｉｇｕｒｅ?６?ｇＥ?ｇｅｎｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ?ｂｌａｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ??Ｑｕｅｒｙ：?ｇＥ?基因序列?Ｓｂｊｃｔ：?ｇｅｎＢａｎｋ：?１２５９５９??２．３．３重组蛋白最佳诱导浓度的确定??经检测当?ＩＰＴＧ?浓度为?０．６ｍｍｏｌ／Ｌ、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ、ｌｍｍｏｌ／Ｌ?时，电泳显示?ｌｍｍｏｌ／Ｌ??浓度时条带明显是７０ＫＤａ，而对照处无条带。如图７所示：??Ｗｉｌｌ??图７重组蛋白不同浓度的诱导表达??Ｆｉｇｕｒｅ?７?Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??Ｍ：?Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｑｕａｌｉｔｙ?ｓｔａｎｄａｒｄｓ；?ｌ－４Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ：?１?：??Ｐｃｏｌｄ＇ＴＦ／Ｔｒａｎｓｅｔｔａ（ＤＥ３）ｉｎｄｕｃｅｄ?ｗｉｔｈＩＰＴＧ，?２?：?０．６ｍｍｏｌ／Ｌ，?３：?０．８ｍｍｏｌ／Ｌ，?４：?ｌｍｍｏｌ／Ｌ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 任亚初,楚会萌,程凯慧,解晓莉,张亮,孙阳阳,杨美,杨宏军,唐月新,刘文浩,李开荣. 中国预防兽医学报. 2019(10)
[2]牛传染性鼻气管炎病毒部分gB蛋白的原核表达及抗原性分析[J]. 何小丽,李凡飞,王文佳,张凯,程成,许立华. 江苏农业科学. 2019(17)
[3]牛传染性鼻气管炎的诊治[J]. 姜强. 畜牧兽医科技信息. 2019(06)
[4]牛传染性鼻气管炎病毒恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立[J]. 张颖慧,岳华,汤承,黄建德. 中国预防兽医学报. 2019(06)
[5]牛疱疹病毒1型感染性疾病的分析诊断和治疗控制措施[J]. 李喆. 饲料博览. 2019(05)
[6]猪伪狂犬病病毒山东分离株gE和gD基因的克隆及序列分析[J]. 张玲玲,时建立,彭喆,徐胜男,郑书轩,吴晓燕,徐绍建,王金宝,李俊. 中国兽医学报. 2017(11)
[7]牛传染性鼻气管炎病毒gB和gE基因双重荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 徐娜,杨帆,雷宇,李平安,关平原. 中国预防兽医学报. 2017(07)
[8]我国牛传染性鼻气管炎的流行与防控现状[J]. 甘瑜萍,余祖琼,黄恒,曾繁泉,陆俊致. 黑龙江畜牧兽医. 2016(04)
[9]牛传染性鼻气管炎的流行与防控进展[J]. 李程,陈颖钰,索朗斯珠,郭爱珍. 中国奶牛. 2015(17)
[10]牛传染性鼻气管炎病毒gD基因截短表达及其抗血清制备[J]. 张辉,宋玲玲,杨宏军,王洪梅,武建明,候佩莉,何洪彬,王立群. 家畜生态学报. 2013(01)
博士论文
[1]IBR间接ELISA的建立及重组gE糖蛋白与单抗的研制[D]. 王海燕.吉林大学 2006
硕士论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒gB基因的截短表达与间接ELISA诊断方法的建立[D]. 宋林.东北农业大学 2015
[2]牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gD单抗制备及其抗原表位鉴定与双抗夹心ELISA的建立[D]. 周跃辉.中国农业科学院 2015
[3]牛传染性鼻气管炎TK/gE基因缺失重组病毒的研究[D]. 定明.华中农业大学 2010
[4]IBRV截短gB基因的表达及ELISA诊断方法的建立[D]. 李伟.吉林大学 2009
[5]牛疱疹病毒Ⅰ型重组抗原的制备及间接ELISA方法的建立[D]. 吴春涛.山东农业大学 2006
[6]牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的分段表达与间接ELISA诊断方法的建立及应用[D]. 李兆利.中国农业科学院 2006
本文编号：3598673
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