B亚群禽白血病病毒GX14FF03株感染性克隆构建与拯救

发布时间：2022-01-23 18:34

　　为探究从灵山土鸡分离的携带J亚群禽白血病病毒（ALV）U3区片段的B亚群ALV（ALV-B）毒株GX14FF03的致病性,试验以GX14FF03毒株核酸为模板,采用PCR方法分2段扩增病毒的cDNA,PCR扩增产物经克隆、酶切后依次连接到pBluescriptⅡKS（+）质粒,最终获得一个含有ALV-B完整前病毒cDNA的重组质粒pBlue-GX14FF03。重组质粒转染DF-1细胞进行病毒拯救,拯救病毒在DF-1细胞盲传3代后收集细胞上清液保存于-80℃,细胞固定后用于间接免疫荧光检测。另取保存细胞上清进行ALV p27抗原检测。间接免疫荧光检测结果及ALV p27抗原检测结果全部为阳性。拯救病毒及亲本病毒接种DF-1细胞后进行体外复制能力测定,结果显示拯救病毒在1、3、5、7、9 d体外复制能力与亲本病毒基本一致,差异不显著（P>0.05）。上述结果表明病毒拯救成功,命名为rGX14FF03。 

【文章来源】：中国家禽. 2020,42(04)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

ALV-B感染性克隆构建示意图

r GX14FF03 IFA鉴定结果

重组质粒经NotⅠ和XbaⅠ双酶切以后，获得了预期大小的条带：长度为3.8 kb的第一片段，长度为7.2 kb的pBluescriptⅡKS（+）质粒（长度3.0 kb）+第二片段（长度4.2 kb）；重组质粒经XbaⅠ和ClaⅠ双酶切以后，获得了预期大小的条带：长度为4.2 kb的第二片段，长度为6.8 kb的pBluescriptⅡKS（+）质粒（长度3.0 kb）+第一片段（长度3.8 kb）；重组质粒经XbaⅠ单酶切以后，获得了长度为约11 kb的预期大小的条带（见图2）。2.2 拯救病毒IFA鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]禽白血病病毒A亚群分离株感染性克隆的构建[J]. 陈雪阳,梁雄燕,方春,顾玉芳,杨玉莹.  畜牧与兽医. 2019(08)
[2]地方品种鸡禽白血病和鸡白痢的危害及净化防控的实践[J]. 韦平,崔治中.  中国家禽. 2015(09)
[3]感染J亚群禽白血病病毒的蛋鸡群中检测出B亚群禽白血病病毒[J]. 刘功振,张洪海,刘青,邱波,王峰,王晓伟,陈洪博,成子强.  病毒学报. 2009(06)

硕士论文
[1]J亚群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的构建及其生物学特性[D]. 张纪元.山东农业大学 2005



本文编号：3604941