Ssc-novel-mir-106-5p在LPS诱导的母猪子宫内膜上皮细胞炎症反应中的作用

发布时间：2022-01-24 07:24

　　子宫内膜炎是导致母猪流产,产仔率下降,母猪淘汰率升高的主要原因,给养猪产业造成了巨大的经济损失。现有的子宫内膜炎的治疗方法还不能达到理想的治疗效果,寻求更为有效的治疗母猪子宫炎症的新方法迫在眉睫。通过探究LPS诱导的牛子宫内膜上皮细胞中的炎症发生机制,可以为治疗子宫内膜炎提供新的思路。然而,LPS诱发子宫内膜炎的分子机制尚不明确,miRNA是否参与猪子宫内膜炎的发病过程还知之甚少。本研究旨在探究miRNA在猪子宫内膜炎发生时的作用机制,以找到新的治疗猪子宫内膜炎的方法。本试验采用6-7月龄的未发情母猪子宫作为试验材料,利用体外培养的子宫内膜细胞主要研究以下几个问题:（1）是否存在新的参与LPS诱导的子宫内膜上皮细胞炎症反应的miRNA;（2）差异表达的miRNA通过作用于哪个靶基因作用并调控炎症相关通路;（3）差异表达的miRNA是否通过影响炎症反应相关通路的激活调节相关炎性因子的分泌。本试验在前期预试验确定LPS剂量的基础上,用LPS处理子宫内膜上皮细胞,处理结束后提取RNA进行高通量测序,找出表达差异显著的miRNA。将测序结果与生物信息分析相结合,预测差异miRNA可能的靶基因。... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

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cDNA文库的构建步骤Fig.3-8ConstructionstepsofthecDNAlibrary文库构建完成后，先使用Qubit2.0进行初步定量，稀释文库至1ng/ul，随后使用Agilent2100对文库的插入片段长度（insertsize）进行检测，insertsize符合预

第 4 章 试验结果第 4 章 试验结果4.1 子宫内膜上皮细胞的分离、培养与纯度鉴定子宫内膜上皮细胞在细胞瓶中培养 24h 后开始贴壁，2 d 后，显微镜下细胞开始贴壁。10 d 左右细胞已经铺满培养瓶的 60 %左右。纯化后再培养 6 d 左右，细胞已经铺满培养瓶的 70%，呈铺路石样（图 4-1A）。由于角蛋白细胞是存在与于上皮细胞的特异性蛋白，因此，本试验以此蛋白作为标志物用于鉴定上皮细胞。结果显示，在一百个细胞中，95%以上的细胞显示结果为阳性。试验结果说明纯化后的子宫内膜上皮细胞纯度足以满足下一步试验要求。（图 4-1B）

西南大学硕士学位论文 RNA 完整性检测将提取的 RNA 进行琼脂糖检测，结果如图 4-2 所示，28s，18s，5s 条带减弱。样品 RNA 的 A260/280 比值均在 1.8-2.0 之间，说明 RNA 纯度能续试验需求。进一步检测发现，对照组及处理组 RNA 浓度均在 100 ng/ml 之间，对照组及 LPS 处理组的 RNA 完整值（RIN 值）均为 9.5（表 4所提 RNA 的浓度，纯度均满足建库要求，可用于后续试验。

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3606134