牛磺熊脱氧胆酸对黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育影响的研究
发布时间：2022-01-24 16:24
本研究主要探讨了内质网应激抑制剂牛磺熊脱氧胆酸（taurocholate ursodeoxycholic acid, TUDCA）对黄牛颗粒细胞增殖,卵母细胞体外成熟及体外受精（IVF）早期胚胎发育的影响,并初步研究其作用的分子机制,以进一步完善黄牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外培养的体系。本研究分为以下两部分。第一部分,研究了TUDCA对黄牛颗粒细胞生长、凋亡及内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）相关基因表达的影响,并用衣霉素（tunicamycin, TM）构建内质网应激途径细胞凋亡模型,探讨TUDCA对TM诱导的内质网应激途径导致细胞凋亡的抑制作用。结果发现：（1）黄牛颗粒细胞经不同浓度（0、500、1000、1500μmol/L）TUDCA体外培养后其生长特性及染色体倍性无明显变化（P>0.05）,但1500μmol/L组的细胞凋亡率显著低于Oμmol/L对照组（P<0.05）；QRT-PCR的结果显示,ERS相关基因Grp78、Ire1、Chop和Bax的表达随着TUDCA浓度的增加均呈下调趋势,在TUDCA浓度为150...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-1黄牛颗粒细胞经不同浓度TUDCA处理后的生长曲线
注：字母不同说明差异显希a，b，C，d (尸<0.05)Note:data with different letters differ significantly(P<0.05).图2-1-3 TUDCA对黄牛颗粒细胞内质网应激相关基闪表达影响Figure 2-1-3 Relative expression of ERS related genes in bovine GCs treated by TUDCA3.1.5 TUDCA处理对颗粒细胞XBP-l剪接的影响通过RT-PCR法检测各浓度处理后的细胞XBP-丨的mRNA剪接情况。XBP-1引物设计时，上下游引物跨过内子26bp剪切段，因此PCR产物分别为无活性的288bp的22
XBP-lu和有活性的262bp的XBP-ls。RT-PCR的检测结果发现：不同浓度TUDCA处理组均检测不到明显的XBP-ls条带,表明XBP-1的mRNA剪接变化不明显I如图2-1-4所示）。300bp Xbp.lu_P【I Nctin0 100 500 1000 1500图2-1-4不同浓度TUDCA对颗粒细胞XBP-1基因mRNA剪接的影响Figure 2-1-4 Effect of different concentrations of TUDCA on XBP-1 splicing in granulosa cells3.2 TM对黄牛颗粒细胞生长及内质网应激相关基因表达的影响本实验中，用不同浓度的内质网应激诱导剂衣霉素（TM)处理黄牛颗粒细胞，探讨TM对黄牛颗粒细胞调亡及内质网应激相关基因的表达情况，建立TM诱导的黄牛颗粒细胞内质网应激介导的细胞调亡模型,初步研究内质网应激介导的细胞调亡在黄牛颗粒细胞的作用机理，为下一步研究黄牛胚胎凋亡提供理论参考。本实验分为两部分。3.2.1 TM对黄牛黄牛颗粒细胞调亡旳影响待第3代黄牛颗粒细胞汇合至70%时，分别使用不同浓度的TM (0、100、500、1000 ng/ml)处理培养细胞12h,观察细胞形态的变化，并用TUNEL染色法检测细胞调亡情况。结果如图2-1-5所示：随着TM浓度的增大，出现漂浮的细胞增多，漂浮细胞中
【参考文献】：
期刊论文
[1]水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定[J]. 高亚可,陆凤花,马帆,乔树叶,陈施蓓,石德顺. 中国畜牧兽医. 2012(10)
本文编号：3606905
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-1黄牛颗粒细胞经不同浓度TUDCA处理后的生长曲线
注：字母不同说明差异显希a，b，C，d (尸<0.05)Note:data with different letters differ significantly(P<0.05).图2-1-3 TUDCA对黄牛颗粒细胞内质网应激相关基闪表达影响Figure 2-1-3 Relative expression of ERS related genes in bovine GCs treated by TUDCA3.1.5 TUDCA处理对颗粒细胞XBP-l剪接的影响通过RT-PCR法检测各浓度处理后的细胞XBP-丨的mRNA剪接情况。XBP-1引物设计时，上下游引物跨过内子26bp剪切段，因此PCR产物分别为无活性的288bp的22
XBP-lu和有活性的262bp的XBP-ls。RT-PCR的检测结果发现：不同浓度TUDCA处理组均检测不到明显的XBP-ls条带,表明XBP-1的mRNA剪接变化不明显I如图2-1-4所示）。300bp Xbp.lu_P【I Nctin0 100 500 1000 1500图2-1-4不同浓度TUDCA对颗粒细胞XBP-1基因mRNA剪接的影响Figure 2-1-4 Effect of different concentrations of TUDCA on XBP-1 splicing in granulosa cells3.2 TM对黄牛颗粒细胞生长及内质网应激相关基因表达的影响本实验中，用不同浓度的内质网应激诱导剂衣霉素（TM)处理黄牛颗粒细胞，探讨TM对黄牛颗粒细胞调亡及内质网应激相关基因的表达情况，建立TM诱导的黄牛颗粒细胞内质网应激介导的细胞调亡模型,初步研究内质网应激介导的细胞调亡在黄牛颗粒细胞的作用机理，为下一步研究黄牛胚胎凋亡提供理论参考。本实验分为两部分。3.2.1 TM对黄牛黄牛颗粒细胞调亡旳影响待第3代黄牛颗粒细胞汇合至70%时，分别使用不同浓度的TM (0、100、500、1000 ng/ml)处理培养细胞12h,观察细胞形态的变化，并用TUNEL染色法检测细胞调亡情况。结果如图2-1-5所示：随着TM浓度的增大，出现漂浮的细胞增多，漂浮细胞中
【参考文献】：
期刊论文
[1]水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定[J]. 高亚可,陆凤花,马帆,乔树叶,陈施蓓,石德顺. 中国畜牧兽医. 2012(10)
本文编号：3606905
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