马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用

发布时间：2022-01-24 23:27

　　【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断。利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证。与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析。【结果】各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相... 

【文章来源】：中国农业科学. 2020,53(10)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

沙门氏菌的分离与鉴定

将获得17株分离株分别进行PCR扩增16S rRNA基因，扩增的产物经1%琼脂糖凝胶电泳。电泳初步表明，获得了1条约1 500bp的特异性条带，与预期大小相一致（图2）。将E.S-1—17株的扩增产物进行测序，氨基酸同源性和核苷酸同源性分析结果表明，E.S-1—17的16S基因组与C77-1序列完全一致，同源性为100%，与同属沙门氏菌AL513382-Typhimurium（鼠伤寒沙门氏菌）、CP000026-Paratyphi A（甲型副伤寒沙门氏菌）、CP000857-Paratyphi C（丙型副伤寒沙门氏菌）、NZ＿CM001062-Choleraesuis（猪霍乱沙门氏菌）、P125109-Enteritidis（肠炎沙门氏菌）同源性为97.4%—99.7%，而与其他细菌同源性为38.4%—40.7%，选取E.S株的的序列进行进化树分析显示，沙门氏菌属与其他种属细菌的同源性低，具有独立的分支，属内细菌间同源性较高（图3）。图3 不同细菌16S rRNA基因的系统进化树

马流产沙门氏菌的凝集结果

【参考文献】：
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本文编号：3607491