热应激通过胰岛素介导的PI3K/Akt信号调控仔猪睾丸支持细胞乳酸合成及分泌

发布时间：2022-01-25 05:18

　　严重热应激对雄性动物的生殖功能有明显的负面影响。支持细胞产生的乳酸不仅是生精细胞最重要的代谢底物,而且还可以增强生精细胞抗凋亡的能力。因此,乳酸在保护雄性动物免受热应激对其生殖功能产生的不利影响方面发挥着重要作用。热应激能增加动物机体的基础胰岛素分泌量,提高胰岛素敏感性。PI3K/Akt在胰岛素介导的葡萄糖代谢过程中发挥着重要作用。温和型热应激（以下简称热应激）能增加支持细胞乳酸的合成和分泌,但热应激是否通过胰岛素介导的PI3K/Akt信号调控支持细胞乳酸合成及分泌目前还不清楚。本实验以21日龄仔猪的睾丸为实验材料,建立体外培养的支持细胞热应激模型。首先,用不同浓度的胰岛素（5²00 nM）处理支持细胞24 h,通过CCK-8试剂盒检测细胞活性,用乳酸测试试剂盒测乳酸分泌量,筛选出合适的胰岛素浓度作为后续试验所用浓度。用筛选出的胰岛素浓度（100 nM）处理细胞0³6 h,测各个时间点细胞分泌的乳酸量,筛选出合适的处理时间。其次,细胞热处理（43℃,30 min）后恢复2 h,再用100 nM胰岛素处理24 h,用定量PCR检测INSR、IG... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

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热应激对生精细胞的影响

31图 4-1 体外培养的支持细胞及其纯度鉴定A.体外培养的支持细胞（100×）B.支持细胞纯度鉴定（100×）Figue.4-1 Cultured Sertoli cells and cell purity identificationA.Cultured Sertoli cells（100×）B.Cell purity identification（100×）4.2 不同浓度胰岛素对乳酸分泌及细胞存活率的影响为了明确胰岛素对支持细胞的作用，本实验首先用不用浓度（0~200 nM）的胰岛素处理支持细胞相同时间（24 h），检测其对支持细胞活性的影响。从图 4-2A 可以看出0~100 nM 胰岛素对支持细胞的活性都没有影响（P>0.05）；当胰岛素浓度为 200 nM 时显著降低了支持细胞的活性(P<0.05)。与对照相比，胰岛素浓度为 200nM 时，胰岛素处理组支持细胞的活性降低了 24.7%(P<0.05)。随后，本实验检测了 0~100 nM 胰岛素对

西南大学硕士学位论文支持细胞分泌的影响。从图 4-2B 可见，5~100 nM 的胰岛素均能显著增加乳酸的分泌量(P<0.05)，且在此范围内，随着胰岛素浓度的增高，乳酸分泌逐步增加，在 100 nM 时达到顶峰，此时与对照组相比增加了 133.3%(P<0.01)；当胰岛素浓度为 200 nM 时，支持细胞乳酸分泌有所下降(P<0.01)。综上结果，后续实验选择的胰岛素处理最适浓度为100 nM。


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