绵羊肺炎支原体生长曲线的测定及灭活疫苗的制备

发布时间：2022-01-25 08:55

　　绵羊肺炎支原体可引起绵羊及山羊发生绵羊支原体肺炎,该肺炎是一种非典型肺炎,广泛分布于世界范围内,危害极其严重。本试验旨在通过全菌灭活制备绵羊肺炎支原体灭活疫苗。肉羊养殖场采集有肺炎症状羊只的鼻拭子、气管及肺脏等病料,采用本实验室自制改良培养基对病料中绵羊肺炎支原体进行分离培养、鉴定。待菌株生长稳定后,以1:6、1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:100、1:200等比例对菌株传代并进行生长曲线的测定,从Oh接菌开始,每6 h进行一次CFU及CCU测定,汇总数据绘制曲线。该结果确定了绵羊肺炎支原体在实验室中的最佳传代比例为1:6或1:20,最高菌量可达1.3×109CFU/mL,最佳收获时间为接种后120h。收集以1:200传代后生长132 h左右,生长滴度达109CFU/mL的培养物,洗涤除去培养基成分,此时生长滴度为5×108CFU/mL,对菌液进行灭活,分别加入等比例的氢氧化铝佐剂和1%的左旋咪唑佐制备绵羊肺炎支原体灭活疫苗。选取10只牧场中健康羊只分别注射这两种灭活疫苗,通过安全性试验后,对200只羊进行两次免疫,并在免疫前采集羊只鼻拭子进行分菌及PCR检测。首... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 综述
    1.1 绵羊肺炎支原体的研究进展
        1.1.1 生物学特性
        1.1.2 致病机理
        1.1.3 病理变化
        1.1.4 临床症状
        1.1.5 流行病学调查
    1.2 诊断
        1.2.1 临床症状诊断
        1.2.2 分离培养
        1.2.3 分子生物学鉴定
        1.2.4 免疫学诊断
    1.3 防治措施
    1.4 绵羊肺炎支原体疫苗的研究进展
    1.5 疫苗制备中佐剂的选择
        1.5.1 佐剂的主要功能
        1.5.2 疫苗中常用佐剂
        1.5.3 使用中存在问题
    1.6 本研究的目的和意义
2 研究一 绵羊肺炎支原体的分离鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株来源
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 培养基的制备
        2.2.2 病原菌的分离
        2.2.3 菌落的形态学鉴定
        2.2.4 抗生素敏感性试验
        2.2.5 分子生物学的检测
        2.2.6 菌株的保存与复苏
    2.3 实验结果
        2.3.1 分菌结果
        2.3.2 菌落的形态学鉴定结果
        2.3.3 抗生素敏感性试验结果
        2.3.4 分子生物学的检测结果
    2.4 讨论
3 研究二 绵羊肺炎支原体的生长曲线测定
    3.1 试验材料
        3.1.1 菌株及培养基
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 颜色变化单位(CCU)计数法
        3.2.2 菌落形成单位(CFU)计数法
    3.3 结果
        3.3.1 菌落形成单位(CFU)计数结果
        3.3.2 颜色变化单位(CCU)计数结果
    3.4 讨论
4 研究三 绵羊肺炎支原体灭活疫苗的制备及免疫效果检测
    4.1 实验材料
        4.1.1 试验动物及菌株
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 试验步骤
        4.2.1 菌液的扩增
        4.2.2 菌量的测定
        4.2.3 菌液的浓缩
        4.2.4 菌液的灭活
        4.2.5 无菌检测
    4.3 绵羊肺炎支原体灭活苗的制备
        4.3.1 佐剂的选择
        4.3.2 灭活疫苗的配制
        4.3.3 灭活疫苗的保存
    4.4 动物试验
        4.4.1 安全性试验
        4.4.2 免疫程序
        4.4.3 抗体水平检测
    4.5 结果
        4.5.1 安全性试验结果
        4.5.2 分菌与PCR结果
        4.5.3 ELISA结果
    4.6 讨论
5 结论
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]羊支原体感染的诊治[J]. 徐炳亮.  畜牧兽医科技信息. 2016(02)
[2]绵羊肺炎支原体FJ01-CL株的分离和鉴定[J]. 江锦秀,林甦,林裕胜,江斌,胡奇林.  福建农业学报. 2015(05)
[3]羊支原体肺炎防治研究进展[J]. 徐春光,郝永清,王明莹,高明华.  动物医学进展. 2014(01)
[4]绵羊肺炎支原体P113蛋白N端原核表达及其抗原性分析[J]. 张贤宇,杨发龙,冯旭飞,王成龙.  中国兽医杂志. 2013(07)
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[10]4种佐剂对绵羊肺炎支原体的免疫辅佐效力研究[J]. 费磊,岳华,汤承.  中国畜牧兽医. 2013(03)

博士论文
[1]丝状支原体PG3株和绵羊肺炎支原体内蒙分离株基因组测序及可变表面脂蛋白基因克隆表达[D]. 徐春光.内蒙古农业大学 2013

硕士论文
[1]绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR及绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立[D]. 郑佳琪.内蒙古农业大学 2016
[2]绵羊肺炎支原体灭活疫苗的研制及免疫效果的评价[D]. 冯广余.石河子大学 2016
[3]绵羊肺炎支原体内蒙古地方株的分离鉴定及交叉反应性的测定[D]. 孙喜安.内蒙古农业大学 2012
[4]绵羊肺炎支原体（Y-98标准株）P30基因真核表达载体构建与P30-IFNγ融合蛋白疫苗研制[D]. 张亚宁.河北师范大学 2012
[5]牛支原体生长特性及其致病性研究[D]. 范媛.西南大学 2011
[6]绵羊肺炎支原体的分离、鉴定及部分生物学特性的研究[D]. 陈宏伟.石河子大学 2005



本文编号：3608252