重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性及体内最佳使用剂量研究
发布时间：2022-01-26 03:36
为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2，重组融合蛋白）在鸡体外的生物学活性及在鸡体内的最佳使用剂量，从而为重组融合蛋白作为抗病毒制剂和免疫增强剂在临床上推广应用提供科学依据，本研究采用夹心ELISA方法分别检测重组融合蛋白与抗rChIFN-和rChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性；采用50%细胞病变抑制法进行了重组融合蛋白和rChIFN-蛋白对照在CEF细胞上抗水泡性口炎病毒（VSV）和传染性法氏囊病病毒（IBDV） LX强毒株的活性比较研究；采用MTS法进行了重组融合蛋白和rChIFN-α在体外促外周血T淋巴细胞（PBLC）和脾脏淋巴细胞增殖活性实验。将IBDV LX强毒株人工感染37日龄SPF鸡，同时分别选取在CEF细胞上抗VSV活性单位为200IU、1000IU、3000IU、5000IU的重组融合蛋白和rChIFN-蛋白采用注射方式进行鸡体内活性比较实验，以筛选重组融合蛋白和rChIFN-蛋白在鸡体内发挥最佳抗病毒和免疫增强活性的使用剂量；分别通过临床观察、检测攻毒前和攻毒后（dpc）不同时间鸡体的排毒率、IBDV在不同...
【文章来源】：河南科技大学河南省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
rChIFN-蛋白阳性对照与抗ChIFN-单抗反应的ELISA检测标准曲线
图 2-1 rChIFN- 蛋白阳性对照与抗 ChIFN- 单抗反应的 ELISA 检测标准曲线Fig. 2-1 The ELISA detection standard curve of the 2×serial dilution of recombinant chickenpositive control2. 重组融合蛋中 rChIL-2 的定量重组融合蛋白和标准品蛋白都可以和 rChIL-2 单抗反应，测定重组融的 OD450值为 0.637，依据试剂盒中 rChIL-2 蛋白标准品对照曲线及其标函数公式 y=43.29x2+161.12x-14.236，计算重组融合蛋白中 rChIL-2 蛋白含量约为 1.06×103pg.mL-1（图 2-2）。说明重组融合蛋白中的 rChIL-2 具rChIL-2 单抗发生特异性免疫反应的生物学活性。
0204060801001201400dpc 3dpc 7dpc 14dpc 21dpc 28dpc食量采（g）nIaket fo fodo攻毒后时间（d）Days post challenge200IU第1组第2组第3组第4组第11组第12组图 3-1 200IU 的重组融合蛋白和 rChIFN- 蛋白实验组鸡攻毒后不同时间采食量变化.3-1 The chickens feed intake changes at different days before and after inoculated by IBDV and 200IrChIFN- -Linker-rChIL-2 complex protein or rChIFN- protein
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡新城疫病毒F基因与鸡白介素-2（IL-2）基因在真核载体中串连表达及免疫原性[J]. 亓丽红,朱剑英,艾武,黄兵,于可响,刘涛,秦卓明,宋敏训. 农业生物技术学报. 2012(11)
[2]鸡IL-2基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测[J]. 谢昆,蒋成砚,胡俊杰,全舒舟,宋银银. 中国农学通报. 2011(14)
[3]鸡法氏囊B淋巴细胞中与鸡传染性法氏囊病病毒VP2相互作用蛋白筛选[J]. 高玉龙,孙芬芬,侯磊,高宏雷,祁小乐,刘娣,华育平,王笑梅. 生物工程学报. 2011(04)
[4]鸡IL-2/NDV-F蛋白抗原表位融合基因的表达及免疫性初探[J]. 许发芝,吴胜国,余为一. 激光生物学报. 2011(02)
[5]鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HQ0806的分离与鉴定[J]. 张利勃,高慎阳. 中国农学通报. 2011(05)
[6]白喉毒素免疫毒素的研究进展[J]. 李泽鸿,文继红,刘文涛,张国利. 中国畜牧兽医. 2011(02)
[7]鸡IL-2和新城疫病毒HN基因在毕赤酵母中的融合表达[J]. 刘一尘,张春杰,程相朝,余祖华,丁轲,汪洋,王臣. 畜牧与兽医. 2010(11)
[8]重组人白细胞介素2-干扰素γ融合蛋白结构建模与活性分析[J]. 吴庆洲,饶桂荣,杨富强,陈光明. 华南国防医学杂志. 2010(02)
[9]鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究[J]. 闫若潜,谢彩华,吴志明,张志凌,刘光辉,刘梅芬. 中国农业科学. 2010(03)
[10]鸡白细胞介素-2原核表达与生物学活性初探[J]. 王黎霞,王彩霞,徐赓,安健. 动物医学进展. 2009(11)
硕士论文
[1]鸡白细胞介素6基因的克隆及对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究[D]. 刘蕊娜.四川农业大学 2008
本文编号：3609736
【文章来源】：河南科技大学河南省
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
rChIFN-蛋白阳性对照与抗ChIFN-单抗反应的ELISA检测标准曲线
图 2-1 rChIFN- 蛋白阳性对照与抗 ChIFN- 单抗反应的 ELISA 检测标准曲线Fig. 2-1 The ELISA detection standard curve of the 2×serial dilution of recombinant chickenpositive control2. 重组融合蛋中 rChIL-2 的定量重组融合蛋白和标准品蛋白都可以和 rChIL-2 单抗反应，测定重组融的 OD450值为 0.637，依据试剂盒中 rChIL-2 蛋白标准品对照曲线及其标函数公式 y=43.29x2+161.12x-14.236，计算重组融合蛋白中 rChIL-2 蛋白含量约为 1.06×103pg.mL-1（图 2-2）。说明重组融合蛋白中的 rChIL-2 具rChIL-2 单抗发生特异性免疫反应的生物学活性。
0204060801001201400dpc 3dpc 7dpc 14dpc 21dpc 28dpc食量采（g）nIaket fo fodo攻毒后时间（d）Days post challenge200IU第1组第2组第3组第4组第11组第12组图 3-1 200IU 的重组融合蛋白和 rChIFN- 蛋白实验组鸡攻毒后不同时间采食量变化.3-1 The chickens feed intake changes at different days before and after inoculated by IBDV and 200IrChIFN- -Linker-rChIL-2 complex protein or rChIFN- protein
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡新城疫病毒F基因与鸡白介素-2（IL-2）基因在真核载体中串连表达及免疫原性[J]. 亓丽红,朱剑英,艾武,黄兵,于可响,刘涛,秦卓明,宋敏训. 农业生物技术学报. 2012(11)
[2]鸡IL-2基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测[J]. 谢昆,蒋成砚,胡俊杰,全舒舟,宋银银. 中国农学通报. 2011(14)
[3]鸡法氏囊B淋巴细胞中与鸡传染性法氏囊病病毒VP2相互作用蛋白筛选[J]. 高玉龙,孙芬芬,侯磊,高宏雷,祁小乐,刘娣,华育平,王笑梅. 生物工程学报. 2011(04)
[4]鸡IL-2/NDV-F蛋白抗原表位融合基因的表达及免疫性初探[J]. 许发芝,吴胜国,余为一. 激光生物学报. 2011(02)
[5]鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HQ0806的分离与鉴定[J]. 张利勃,高慎阳. 中国农学通报. 2011(05)
[6]白喉毒素免疫毒素的研究进展[J]. 李泽鸿,文继红,刘文涛,张国利. 中国畜牧兽医. 2011(02)
[7]鸡IL-2和新城疫病毒HN基因在毕赤酵母中的融合表达[J]. 刘一尘,张春杰,程相朝,余祖华,丁轲,汪洋,王臣. 畜牧与兽医. 2010(11)
[8]重组人白细胞介素2-干扰素γ融合蛋白结构建模与活性分析[J]. 吴庆洲,饶桂荣,杨富强,陈光明. 华南国防医学杂志. 2010(02)
[9]鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究[J]. 闫若潜,谢彩华,吴志明,张志凌,刘光辉,刘梅芬. 中国农业科学. 2010(03)
[10]鸡白细胞介素-2原核表达与生物学活性初探[J]. 王黎霞,王彩霞,徐赓,安健. 动物医学进展. 2009(11)
硕士论文
[1]鸡白细胞介素6基因的克隆及对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究[D]. 刘蕊娜.四川农业大学 2008
本文编号：3609736
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