维生素D受体对小鼠睾丸组织硬脂酰辅酶A去饱和酶1基因表达的影响
发布时间：2022-02-05 03:52
为探究小鼠睾丸组织中维生素D受体（VDR）对硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD-1）基因表达的影响,首先对6月龄、12月龄野生型和VDR敲除型小鼠睾丸组织进行转录组测序分析,发现VDR敲除后SCD-1基因表达显著降低,并通过RT-qPCR对转录组测序结果进行验证。随后构建了融合表达载体pEGFP-VDR,在293T细胞中检测VDR的定位。接着将pEGFP-VDR和pCDNA3.1-VDR重组质粒以及VDR特异性siRNA分别转染至睾丸间质细胞TM3,利用RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰VDR表达对SCD-1表达的影响。结果显示,VDR敲除后,睾丸组织中SCD-1的表达量在6月龄和12月龄小鼠中均极显著下降;EGFP的核内分布因核转录因子VDR介导的作用明显多于细胞质;TM3细胞中过表达VDR对SCD-1基因表达无显著差异,干扰VDR后,SCD-1转录水平显著下降,但蛋白水平差异不显著。据此认为,正常水平的VDR对于SCD-1基因表达和功能维持是必要的, VDR缺失会严重影响SCD-1的功能,研究结果为VDR调控SCD-1基因表达研究奠定了基础,为VDR与脂代谢及雄性...
【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(12)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
pEGFP-VDR融合表达载体构建与鉴定
pEGFP-VDR融合表达载体验证
TM3细胞为睾丸间质细胞,负责合成分泌雄性激素,促进精子发生和雄性生殖器官发育,故以其为研究对象,分别进行了VDR过表达和干扰试验,分析调控VDR对SCD-1基因表达的影响(图4和5)。采用pCDNA3.1-VDR和pEGFP-VDR 2个VDR过表达载体进行分析,是为了确认EGFP和VDR融合后是否影响VDR功能。RT-qPCR和Western blot结果显示,pEGFP-VDR和pCDNA3.1-VDR均在TM3细胞中实现VDR的过表达(图4A、B和C)。在确认VDR过表达后,进行了SCD-1的表达水平检测,结果发现,在TM3细胞中过表达VDR后,SCD-1 mRNA和蛋白水平均略有上升,但与对照组相比无显著性差异(图4D、E和4F)。本研究设计3条VDR si-RNA进行VDR干扰试验,发现si-VDR-Mus-1379、si-VDR-Mus-991和si-VDR-Mus-1204的干扰效率分别为47.7%、40%及18%(图5A),干扰效率最高的si-VDR-Mus-991组VDR蛋白表达水平下降24%((图5B、图5C)。对VDR干扰效率较好的2组细胞进行SCD-1表达水平分析,发现si-VDR-Mus-1379组水平显著下降,si-VDR-Mus-991组水平下降极显著(图5D),对si-VDR-Mus-991组SCD-1蛋白水平检测发现,蛋白表达降低,但与对照组比较差异不显著(图5E、图5F)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]维生素D受体研究进展[J]. 杨伟杰,赵伟鑫,刘永亮,魏攀鹏,侯文博,王珊,苗志国. 河南科技学院学报(自然科学版). 2019(05)
[2]组织肾素-血管紧张素系统、维生素D受体和Wnt/β-catenin在慢性病中交互作用的研究进展[J]. 李文雄,丁凡,王拥军,施杞,张岩. 中国药理学通报. 2019(10)
[3]维生素D受体在肿瘤中作用的研究进展[J]. 田思宇,李志伟,蔡望伟. 心理月刊. 2019(09)
[4]维生素D受体基因多态性与骨质疏松症相关性的研究进展[J]. 李明,李宁宁. 右江医学. 2019(04)
[5]维生素D受体基因敲除小鼠品系的建立与鉴定[J]. 赵家荣,刘欢,张涛,王令,路宏朝,杜伟立. 中国实验动物学报. 2018(06)
[6]秀丽线虫硬脂酰辅酶A去饱和酶的研究进展[J]. 胡英,肖丽霞,梁斌. 生物物理学报. 2015(01)
硕士论文
[1]VDR对雄性小鼠生殖与脂代谢影响及相关基因表达调控研究[D]. 刘欢.陕西理工大学 2019
本文编号：3614512
【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(12)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
pEGFP-VDR融合表达载体构建与鉴定
pEGFP-VDR融合表达载体验证
TM3细胞为睾丸间质细胞,负责合成分泌雄性激素,促进精子发生和雄性生殖器官发育,故以其为研究对象,分别进行了VDR过表达和干扰试验,分析调控VDR对SCD-1基因表达的影响(图4和5)。采用pCDNA3.1-VDR和pEGFP-VDR 2个VDR过表达载体进行分析,是为了确认EGFP和VDR融合后是否影响VDR功能。RT-qPCR和Western blot结果显示,pEGFP-VDR和pCDNA3.1-VDR均在TM3细胞中实现VDR的过表达(图4A、B和C)。在确认VDR过表达后,进行了SCD-1的表达水平检测,结果发现,在TM3细胞中过表达VDR后,SCD-1 mRNA和蛋白水平均略有上升,但与对照组相比无显著性差异(图4D、E和4F)。本研究设计3条VDR si-RNA进行VDR干扰试验,发现si-VDR-Mus-1379、si-VDR-Mus-991和si-VDR-Mus-1204的干扰效率分别为47.7%、40%及18%(图5A),干扰效率最高的si-VDR-Mus-991组VDR蛋白表达水平下降24%((图5B、图5C)。对VDR干扰效率较好的2组细胞进行SCD-1表达水平分析,发现si-VDR-Mus-1379组水平显著下降,si-VDR-Mus-991组水平下降极显著(图5D),对si-VDR-Mus-991组SCD-1蛋白水平检测发现,蛋白表达降低,但与对照组比较差异不显著(图5E、图5F)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]维生素D受体研究进展[J]. 杨伟杰,赵伟鑫,刘永亮,魏攀鹏,侯文博,王珊,苗志国. 河南科技学院学报(自然科学版). 2019(05)
[2]组织肾素-血管紧张素系统、维生素D受体和Wnt/β-catenin在慢性病中交互作用的研究进展[J]. 李文雄,丁凡,王拥军,施杞,张岩. 中国药理学通报. 2019(10)
[3]维生素D受体在肿瘤中作用的研究进展[J]. 田思宇,李志伟,蔡望伟. 心理月刊. 2019(09)
[4]维生素D受体基因多态性与骨质疏松症相关性的研究进展[J]. 李明,李宁宁. 右江医学. 2019(04)
[5]维生素D受体基因敲除小鼠品系的建立与鉴定[J]. 赵家荣,刘欢,张涛,王令,路宏朝,杜伟立. 中国实验动物学报. 2018(06)
[6]秀丽线虫硬脂酰辅酶A去饱和酶的研究进展[J]. 胡英,肖丽霞,梁斌. 生物物理学报. 2015(01)
硕士论文
[1]VDR对雄性小鼠生殖与脂代谢影响及相关基因表达调控研究[D]. 刘欢.陕西理工大学 2019
本文编号：3614512
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