梅花鹿—牛异种克隆胚胎构建
发布时间：2022-02-08 18:25
本研究以梅花鹿角柄骨膜细胞为核供体，MⅡ期牛卵母细胞为受体，挤压法去核，构建梅花鹿-牛异种重构胚。从电场强度、电脉冲次数、脉冲持续时间和融合前恢复培养时间这四个方面，探讨了电融合参数对梅花鹿-牛异种重组胚融合效果和卵裂的影响，结果以融合率、死亡卵率和卵裂率计。主要结果和内容如下：一、梅花鹿角柄骨膜细胞生长曲线及染色体组型分析1.第9代梅花鹿角柄骨膜细胞在38.5℃、5%CO2、饱和湿度、10%FBS培养条件下仍然具有哺乳动物细胞典型的“S”型生长曲线，增殖迅速。该培养条件适宜角柄骨膜细胞的生长。2.对第9代的梅花鹿角柄骨膜细胞进行常规染色体检测，统计分析表明染色体组型为2n=66。说明长时间的传代培养不会改变角柄骨膜细胞遗传特性，可以作为体细胞核移植的供核细胞。二、电融合参数对梅花鹿-牛异种重构胚融合效果和卵裂的影响1.2.4KV/cm电场强度重组胚融合率（48.6%）显著高于其他三组（25.2%、41.0%、31.1%，P＜0.05），但在死亡卵率和卵裂率方面四组差异不显著（P>0.05）。2.1次电脉冲次数组和2次、3次组在重组胚融合率、死亡卵率和卵裂率方面差异不显著（P&g...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
梅花鹿F9代角柄骨膜细胞生长曲线
第9代梅花鹿角柄骨膜细胞染色体Fig.2-2Chromosomesofthe9thgenerationSikaDeerPedicleperiosteumcells
消化好的供体PP细胞（100X）
【参考文献】：
期刊论文
[1]延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究[J]. 杨月春,李钟淑,王士勇,方南洙. 延边大学农学学报. 2009(03)
[2]猪体细胞核移植电融合参数的研究[J]. 李日聪,王锦,薛林涛,覃琦丽,陈自洪,石德顺. 广西农业生物科学. 2008(04)
[3]电融合条件对新疆盘羊（Ovis ammon）和转基因（GFP）萨能奶山羊核移植胚胎发育的影响[J]. 王亮,彭涛,朱海,吕自力,帅志强,刘婷婷,高红,蔡涛,曹旭,汪汉卿. 西北农业学报. 2006(02)
[4]克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响[J]. 张利生,毕春明,李劲松,吴昱琪,寇朝辉,姜岩,蒋满喜,吕自力,王小宁,孙青原,陈大元. 自然科学进展. 2004(05)
[5]显微操作针的制作[J]. 马育芳,吕自力,王小宁,帅志强,彭涛,王安江. 黑龙江动物繁殖. 2004(01)
[6]Embryonic stem cells generated by nuclear transfer of human somatic nuclei into rabbit oocytes[J]. YING CHEN, ZHI Xu HE, AILIAN LIU, KAI WANG, WEN WEI MAO, JIAN XIN CHU, YONG LU, ZHENG Fu FANG, YING TANG SHI, QING ZHANG YANG, DA YUAN CHEN, MIN RANG WANG, JIN SONG LI, SHAO LIANG HUANG, XIANG YIN KONG, YAO ZHOU SHI, Zm QIANG WANG, JIA HuI XIA, ZHI GAO LONG, ZHI GANG XUE, WEN XIANG DING, HuI ZHEN SHENG Center for Developmental Biology, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200092, China Laboratory of Stem Cell Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, 1665 Kong Jiang Road, Shanghai 200092, China Center for Stem Cell Research, the Second Affiliated Hospital, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120,China State Key Laboratory of Reproductive Biology, Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, 19 Zhong-guan Cun Road, Haidian District, Beijing 100080, China Health Science Center, Shanghai Institutes of Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences and Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China National Laboratory of Medical Genetics, Central South University, 88 Xiangya Road, Changsha 410078, China Xinhua Hospital, Shanghai Second Medical University, 1665 Kong Jiang Road, Shanghai 200092, China. Cell Research. 2003(04)
[7]鼠猪异种细胞核移植[J]. 李光鹏,兰国成,刘莹,于元松,孙兴参,马所峰,谭景和. 动物学研究. 2000(05)
[8]大熊猫供核体细胞在兔卵胞质中可去分化而支持早期重构胚发育[J]. 陈大元,孙青原,刘冀珑,李光鹏,廉莉,王敏康,韩之明,宋祥芬,李劲松,孙强,陈玉村,张亚平,丁波. 中国科学C辑:生命科学. 1999(03)
[9]猪2-细胞胚胎细胞的电融合[J]. 陈乃清,赵浩斌,苟德明,樊俊华,魏庆信. 中国兽医学报. 1999(01)
[10]动物胚胎细胞核移植显微操作问题的探讨[J]. 雷安民,高志敏,窦忠英. 黄牛杂志. 1998(06)
博士论文
[1]RNA干扰沉默cbfa1基因对鹿茸干细胞成骨抑制作用的研究[D]. 孙红梅.中国农业科学院 2010
硕士论文
[1]梅花鹿染色体研究[D]. 阳春.重庆师范大学 2005
本文编号：3615538
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
梅花鹿F9代角柄骨膜细胞生长曲线
第9代梅花鹿角柄骨膜细胞染色体Fig.2-2Chromosomesofthe9thgenerationSikaDeerPedicleperiosteumcells
消化好的供体PP细胞（100X）
【参考文献】：
期刊论文
[1]延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究[J]. 杨月春,李钟淑,王士勇,方南洙. 延边大学农学学报. 2009(03)
[2]猪体细胞核移植电融合参数的研究[J]. 李日聪,王锦,薛林涛,覃琦丽,陈自洪,石德顺. 广西农业生物科学. 2008(04)
[3]电融合条件对新疆盘羊（Ovis ammon）和转基因（GFP）萨能奶山羊核移植胚胎发育的影响[J]. 王亮,彭涛,朱海,吕自力,帅志强,刘婷婷,高红,蔡涛,曹旭,汪汉卿. 西北农业学报. 2006(02)
[4]克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响[J]. 张利生,毕春明,李劲松,吴昱琪,寇朝辉,姜岩,蒋满喜,吕自力,王小宁,孙青原,陈大元. 自然科学进展. 2004(05)
[5]显微操作针的制作[J]. 马育芳,吕自力,王小宁,帅志强,彭涛,王安江. 黑龙江动物繁殖. 2004(01)
[6]Embryonic stem cells generated by nuclear transfer of human somatic nuclei into rabbit oocytes[J]. YING CHEN, ZHI Xu HE, AILIAN LIU, KAI WANG, WEN WEI MAO, JIAN XIN CHU, YONG LU, ZHENG Fu FANG, YING TANG SHI, QING ZHANG YANG, DA YUAN CHEN, MIN RANG WANG, JIN SONG LI, SHAO LIANG HUANG, XIANG YIN KONG, YAO ZHOU SHI, Zm QIANG WANG, JIA HuI XIA, ZHI GAO LONG, ZHI GANG XUE, WEN XIANG DING, HuI ZHEN SHENG Center for Developmental Biology, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200092, China Laboratory of Stem Cell Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, 1665 Kong Jiang Road, Shanghai 200092, China Center for Stem Cell Research, the Second Affiliated Hospital, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120,China State Key Laboratory of Reproductive Biology, Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, 19 Zhong-guan Cun Road, Haidian District, Beijing 100080, China Health Science Center, Shanghai Institutes of Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences and Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China National Laboratory of Medical Genetics, Central South University, 88 Xiangya Road, Changsha 410078, China Xinhua Hospital, Shanghai Second Medical University, 1665 Kong Jiang Road, Shanghai 200092, China. Cell Research. 2003(04)
[7]鼠猪异种细胞核移植[J]. 李光鹏,兰国成,刘莹,于元松,孙兴参,马所峰,谭景和. 动物学研究. 2000(05)
[8]大熊猫供核体细胞在兔卵胞质中可去分化而支持早期重构胚发育[J]. 陈大元,孙青原,刘冀珑,李光鹏,廉莉,王敏康,韩之明,宋祥芬,李劲松,孙强,陈玉村,张亚平,丁波. 中国科学C辑:生命科学. 1999(03)
[9]猪2-细胞胚胎细胞的电融合[J]. 陈乃清,赵浩斌,苟德明,樊俊华,魏庆信. 中国兽医学报. 1999(01)
[10]动物胚胎细胞核移植显微操作问题的探讨[J]. 雷安民,高志敏,窦忠英. 黄牛杂志. 1998(06)
博士论文
[1]RNA干扰沉默cbfa1基因对鹿茸干细胞成骨抑制作用的研究[D]. 孙红梅.中国农业科学院 2010
硕士论文
[1]梅花鹿染色体研究[D]. 阳春.重庆师范大学 2005
本文编号：3615538
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