产纤维素酶的牛源纤维化微小菌分离鉴定及生物学特性分析
发布时间：2022-02-09 20:03
为研究牛等大型家畜肠道菌群的多样性及饲草性纤维素分解菌的背景,从东北及内蒙牛养殖主产区和屠宰加工区环境中采集大量动物毛发、粪便、肉样、血液样品,共计分离620株纤维化微小菌。对其中200株进行了纤维素酶等筛选,共79株具有较为明显的纤维素酶活性,其中1株从牛粪便中分离的纤维化微小菌（72-3）的初步分析结果表明,该菌纤维素酶活性较高,具有分泌纤维素酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、几丁质酶、果胶酶、木聚糖酶等多种酶的能力。经基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪MALDI-TOF、法国梅里埃VITEK生化鉴定仪和16S rDNA鉴定,确定为放线菌门中的纤维化微小菌（Cellulosimicrobium sp.nov.）,经小鼠急性毒性试验表明,该株菌具有低致病性,对动物是安全的。药敏试验结果显示,该菌对24种抗菌药中的20种耐药,仅对4种抗生素头孢哌酮、头孢曲松、磺胺异恶唑、阿奇霉素敏感。这一研究首次从家畜牛体内分离出纤维化微小菌,为家畜肠道内菌群多样性及纤维素消化等研究提供相关依据,也为后续纤维化微小菌的相关酶学性质开发利用奠定科学基础。
【文章来源】：扬州大学学报(农业与生命科学版). 2020,41(05)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
图1 分离菌株在LB固体培养基上的菌落 形态(A)和革兰染色形态(B)(×1 000)
对分离菌株72-3进行了MALDI-TOF MS质谱鉴定,结果见图2。由表1可知,该菌株能使硝酸还原,且葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、甘露糖、麦芽糖、D-核糖、纤维二糖、岩藻糖、L-山梨糖、来苏糖、D-木糖、木糖醇、棉子糖、水杨苷、龙胆二糖、鸟氨酸脱羧酶、β-半乳糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺、葡萄糖酸钾、赖氨酸、七叶灵、苦杏仁苷、阿拉伯醇、吲哚试验反应为阳性,精氨酸、脲酶、明胶、产乙酰甲基甲醇、甘露醇、乙二酸、苹果酸、柠檬酸、苯乙酸、鸟氨酸、山梨醇、鼠李糖、蜜二糖、氧化酶等生化反应均为阴性。根据以上形态学观察、质谱鉴定和生化鉴定结果,初步鉴定该菌为纤维化微小菌属(Cellulosimicrobiums)细菌。2.3 产酶活性初步鉴定
2.4 16S rDNA测序和系统发育分析以分离株72-3的DNA为模板,经PCR扩增获得片段大小约1.4 kb的单一条带(图4), 与GenBank 中的芬克纤维化微小菌[Cellulosimicrobium funkei strain W6122 (NR-042937.1)] 16S rDNA基因序列同源性为99.57%, 上传72-3菌株16S rDNA序列到NCBI上得到序列号MN-596021。构建系统进化树, 菌株72-3与纤维化微小菌属 (Cellulosimicrobium) 构成一个稳定的聚类群, 关系最近; 其中与已知标准菌株水生纤维化微小菌 (Cellulosimicrobium aquatile strain 3bp) 聚在一个进化分支, 两者序列相似性达99% (图5)。结合菌落形态、细菌的蛋白指纹图、分离株16S rDNA鉴定结果、分离株生理生化特性,鉴定菌株72-3为纤维菌属中纤维化微小菌的一个菌株。菌株保藏于中国微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC No.1.18667。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中华条颈龟致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 方振华,曾玉梅,洪美玲,丁利. 中国畜牧兽医. 2019(09)
[2]血清4型猪链球菌的分离鉴定及其致病性和药物敏感性分析[J]. 郑成坤,贾梦蝶,王彦红. 中国兽医科学. 2019(11)
[3]鲫鱼维隆气单胞菌和腐败希瓦菌的分离鉴定、致病性和药敏分析[J]. 梅寒,王鑫毅,卜令飞,金珊,赵青松,陈寅儿. 宁波大学学报(理工版). 2019(01)
[4]中华绒螯蟹“水瘪子”病超微病理和病理生理研究[J]. 杨宗英,曾柳根,王玉兰,姚毅,侯玉洁,雷小青,许亮清,熊春贤,杨先乐. 浙江农业学报. 2018(07)
[5]动物肠道屏障功能对肠道菌群变化的调控[J]. 张小凤,郭雁君,蒋惠,郭丽英,周希琴,胡亚平,吉前华. 湖北农业科学. 2018(12)
[6]Antimicrobial susceptibility testing for Helicobacter pylori in times of increasing antibiotic resistance[J]. Sinéad M Smith,Colm O’Morain,Deirdre McNamara. World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
[7]苯酚降解纤维菌的分离鉴定及降解特性研究[J]. 刘爱华,王梅梅,袁庚,熊亚南,朱丽华,章广玲,李淑英,袁丽杰. 安全与环境学报. 2013(03)
[8]一株适于生产饲用复合酶制剂菌株的生物学特性及酶系分析[J]. 施安辉,单宝龙,贾朋辉,杨军方,徐海燕,吕明霞,张志焱,程秀芳. 饲料工业. 2005(24)
[9]家畜肠道细菌与生产性能的关系(下)[J]. 程伶. 国外畜牧科技. 1995(03)
本文编号：3617574
【文章来源】：扬州大学学报(农业与生命科学版). 2020,41(05)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
图1 分离菌株在LB固体培养基上的菌落 形态(A)和革兰染色形态(B)(×1 000)
对分离菌株72-3进行了MALDI-TOF MS质谱鉴定,结果见图2。由表1可知,该菌株能使硝酸还原,且葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、甘露糖、麦芽糖、D-核糖、纤维二糖、岩藻糖、L-山梨糖、来苏糖、D-木糖、木糖醇、棉子糖、水杨苷、龙胆二糖、鸟氨酸脱羧酶、β-半乳糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺、葡萄糖酸钾、赖氨酸、七叶灵、苦杏仁苷、阿拉伯醇、吲哚试验反应为阳性,精氨酸、脲酶、明胶、产乙酰甲基甲醇、甘露醇、乙二酸、苹果酸、柠檬酸、苯乙酸、鸟氨酸、山梨醇、鼠李糖、蜜二糖、氧化酶等生化反应均为阴性。根据以上形态学观察、质谱鉴定和生化鉴定结果,初步鉴定该菌为纤维化微小菌属(Cellulosimicrobiums)细菌。2.3 产酶活性初步鉴定
2.4 16S rDNA测序和系统发育分析以分离株72-3的DNA为模板,经PCR扩增获得片段大小约1.4 kb的单一条带(图4), 与GenBank 中的芬克纤维化微小菌[Cellulosimicrobium funkei strain W6122 (NR-042937.1)] 16S rDNA基因序列同源性为99.57%, 上传72-3菌株16S rDNA序列到NCBI上得到序列号MN-596021。构建系统进化树, 菌株72-3与纤维化微小菌属 (Cellulosimicrobium) 构成一个稳定的聚类群, 关系最近; 其中与已知标准菌株水生纤维化微小菌 (Cellulosimicrobium aquatile strain 3bp) 聚在一个进化分支, 两者序列相似性达99% (图5)。结合菌落形态、细菌的蛋白指纹图、分离株16S rDNA鉴定结果、分离株生理生化特性,鉴定菌株72-3为纤维菌属中纤维化微小菌的一个菌株。菌株保藏于中国微生物菌种保藏中心,保藏号为CGMCC No.1.18667。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中华条颈龟致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 方振华,曾玉梅,洪美玲,丁利. 中国畜牧兽医. 2019(09)
[2]血清4型猪链球菌的分离鉴定及其致病性和药物敏感性分析[J]. 郑成坤,贾梦蝶,王彦红. 中国兽医科学. 2019(11)
[3]鲫鱼维隆气单胞菌和腐败希瓦菌的分离鉴定、致病性和药敏分析[J]. 梅寒,王鑫毅,卜令飞,金珊,赵青松,陈寅儿. 宁波大学学报(理工版). 2019(01)
[4]中华绒螯蟹“水瘪子”病超微病理和病理生理研究[J]. 杨宗英,曾柳根,王玉兰,姚毅,侯玉洁,雷小青,许亮清,熊春贤,杨先乐. 浙江农业学报. 2018(07)
[5]动物肠道屏障功能对肠道菌群变化的调控[J]. 张小凤,郭雁君,蒋惠,郭丽英,周希琴,胡亚平,吉前华. 湖北农业科学. 2018(12)
[6]Antimicrobial susceptibility testing for Helicobacter pylori in times of increasing antibiotic resistance[J]. Sinéad M Smith,Colm O’Morain,Deirdre McNamara. World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
[7]苯酚降解纤维菌的分离鉴定及降解特性研究[J]. 刘爱华,王梅梅,袁庚,熊亚南,朱丽华,章广玲,李淑英,袁丽杰. 安全与环境学报. 2013(03)
[8]一株适于生产饲用复合酶制剂菌株的生物学特性及酶系分析[J]. 施安辉,单宝龙,贾朋辉,杨军方,徐海燕,吕明霞,张志焱,程秀芳. 饲料工业. 2005(24)
[9]家畜肠道细菌与生产性能的关系(下)[J]. 程伶. 国外畜牧科技. 1995(03)
本文编号：3617574
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3617574.html
