马天然免疫限制因子tetherin对马传染性贫血病毒的限制作用及病毒拮抗机制研究

发布时间：2022-02-12 18:15

　　马传染性贫血病毒（equine infectious anemia virus, EIAV）是巨噬细胞嗜性的慢病毒。EIAV与其它慢病毒成员的基因组结构、生命周期及抗原漂移规律等相似,但EIAV基因组最小,同时遗传物质也最为简单。除编码Gag、Pol及Env等结构蛋白之外,EIAV仅编码Tat、Rev、S2、Ttm四种辅助蛋白。目前,对于EIAV编码蛋白的功能性研究多从病原学角度着手,而它们与宿主细胞因子相互作用方面的研究相对有限。EIAV感染后能引起马匹持续性感染,与其它慢病毒不同,90%的EIAV感染马匹能转归为无症状携带状态,这可能源于感染宿主细胞对EIAV复制的良好免疫控制。因此,EIAV成为研究如何实现对慢病毒感染和致病进行天然免疫控制的重要慢病毒模型。病毒感染宿主细胞后,可激活干扰素应答反应,诱导产生干扰素刺激基因（interferon stimulated genes, ISGs）。其中它们中的部分成员即为天然免疫限制因子。这些限制性因子分别作用于病毒生命周期的不同阶段,对逆转录病毒的侵入、复制和出芽存在限制作用,形成良好的种间屏障。但病毒在长期进化过程中利用自身编码蛋白... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 EIAV的发现
    1.2 EIAV的传播与控制
    1.3 EIAV的病毒粒子结构与构成
    1.4 EIAV的编码蛋白与功能
        1.4.1 结构蛋白
        1.4.2 辅助蛋白
    1.5 EIAV的细胞嗜性
    1.6 EIAV的生命周期
        1.6.1 EIAV的入侵过程
        1.6.2 EIAV的脱衣壳过程
        1.6.3 EIAV的反转录过程
        1.6.4 EIAV的整合过程
        1.6.5 EIAV的转录与翻译过程
        1.6.6 EIAV的出芽与组装过程
    1.7 天然免疫限制因子研究进展
        1.7.1 APOBEC3
        1.7.2 TRIM5α
        1.7.3 SAMHD1
        1.7.4 MoV10
    1.8 Tetherin的抗病毒及病毒拮抗机制研究
        1.8.1 Tetherin的分子特征
        1.8.2 Tetherin的抗病毒作用机制
        1.8.3 Tetherin的拮抗蛋白
    1.9 本研究的目的与意义
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞与病毒
        2.1.2 质粒与菌株
        2.1.3 试剂与耗材
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 试剂配制
    2.2 方法
        2.2.1 马巨噬细胞的分离培养
        2.2.2 RNA的提取与反转录
        2.2.3 普通PCR与定点突变PCR反应
        2.2.4 Real-time RT-PCR
        2.2.5 siRNA干扰实验
        2.2.6 病毒一步生长曲线的绘制
        2.2.7 细胞转染
        2.2.8 Western Blotting
        2.2.9 激光共聚焦检测
        2.2.10 免疫共沉淀
        2.2.11 数据分析
3 结果
    3.1 马tetherin基因的克隆及结构分析
    3.2 马干扰素对马tetherin的诱导调控研究
        3.2.1 马tetherin启动子序列的分析
        3.2.2 马干扰素对马tetherin的诱导表达
    3.3 马tetherin的抗病毒活性研究
        3.3.1 马巨噬细胞内源性表达tetherin的抗病毒活性研究
        3.3.2 马tetherin的抗逆转录病毒活性分析
        3.3.3 马tetherin与EIAV病毒粒子的相互作用
        3.3.4 马tetherin抗病毒关键功能域的分析
    3.4 EIAV对马tetherin抗病毒活性的拮抗机制研究
        3.4.1 野生型EIAV对不同种属tetherin抗病毒活性的敏感性
        3.4.2 HIV-1 Vpu对马tetherin抗病毒活性的拮抗作用
        3.4.3 EIAV Rev与S2蛋白对马tetherin抗病毒活性的拮抗作用
        3.4.4 EIAV Env蛋白对马tetherin抗病毒活性的拮抗作用
4 讨论
    4.1 马tetherin蛋白的分子结构及功能
    4.2 马tetherin广谱抗病毒活性的探讨
    4.3 EIAV拮抗马tetherin抗病毒活性的分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]EIAV减毒疫苗诱导的特异性细胞免疫应答[J]. 张晓燕,李红梅,梁华,沈弢,马燕,相文华,沈荣显,邵一鸣.  细胞与分子免疫学杂志. 2006(01)
[2]马传染性贫血病毒囊膜蛋白GP90的表达及其免疫效果研究[J]. 戴传斌,肖瑶,陆红,沈荣显,邵一鸣.  中华实验和临床病毒学杂志. 2003(01)

硕士论文
[1]马、驴、人、恒河猴四种属Tetherin蛋白对马传染性贫血病毒抑制作用的研究[D]. 谷勤雍.东北农业大学 2013
[2]干扰素应答分子Tetherin对抗马传染性贫血病毒的作用机制研究[D]. 吴星亮.中国农业科学院 2013



本文编号：3622198