猪白介素-18和干扰素γ在乳酸乳球菌中的表达及生物活性的检测

发布时间：2022-02-13 15:13

　　白介素-18（interleukin-18,IL-18）是白细胞介素中的一种,因其能够诱导T细胞产生大量IFN-γ最初被称为IFN-γ诱生因子。IL-18在增强免疫、抗肿瘤、抗病原微生物感染、抑制病毒活性等方面有着潜在的应用前景。γ干扰素（IFN-γ）也称为免疫干扰素,具有抑制病毒的复制、抗肿瘤、抗寄生虫及免疫调节等作用。本试验将pIL-18和pIFN-γ基因分别在乳酸乳球菌表达系统中分泌表达,对其生物学活性进行检测,并将pIL-18、pIFN-γ蛋白与猪伪狂犬病活疫苗联合使用,分析评价其对疫苗免疫效果的影响。本研究首先通过无菌提取猪脾脏淋巴细胞总RNA,根据pIL-18和pIFN-γ基因序列设计引物,经RT-PCR扩增pIL-18和pIFN-γ基因。将pIL-18和pIFN-γ基因与表达载体pProExHTa连接,构建重组表达质粒pProExHTa-pIL-18、pProExHTa-pIFN-γ,并转入大肠杆菌,经诱导表达pIL-18、pIFN-γ蛋白,SDS-PAGE结果显示蛋白表达。表达蛋白经纯化后肌注小鼠,制备出pIL-18、pIFN-γ的抗血清,测得血清效价为1：25600。... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 白介素-18(interleukin-18,IL-18)的研究进展
        1.1.1 IL-18的结构特点
        1.1.2 IL-18的受体及信号传导
        1.1.3 IL-18的生物学活性
    1.2 γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的研究进展
        1.2.1 γ-干扰素的结构特点
        1.2.2 γ干扰素受体及其信号传导机制
        1.2.3 干扰素的生物学活性
        1.2.4 γ干扰素的应用及发展前景
    1.3 乳酸乳球菌作为宿主菌表达外源蛋白的研究进展
        1.3.1 乳酸乳球菌的益生作用
        1.3.2 乳酸乳球菌作为表达载体宿主菌的优越性
        1.3.3 乳酸乳球菌作为表达载体的应用
    1.4 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒与细胞
        2.1.2 质粒、菌种与疫苗
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要试剂
        2.1.6 主要实验仪器与设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 pIL-18和pIFN-γ基因的获得
        2.2.2 表达pIL-18和pIFN-γ重组大肠杆菌的构建
        2.2.3 多克隆抗血清的制备
        2.2.4 表达pIL-18和pIFN-γ重组乳酸乳球菌的构建
        2.2.5 重组乳酸乳球菌的诱导表达及鉴定
        2.2.6 pIL-18和pIFN-γ抗病毒活性的检测
        2.2.7 pIL-18和pIFN-γ作为免疫佐剂的效果分析
3 结果
    3.1 目的基因pIL-18和pIFN-γ的获得
        3.1.1 PCR扩增结果
        3.1.2 pMD18-T-pIL-18、pMD18-T-pIFN-γ的质粒鉴定结果
    3.2 表达pIL-18和pIFN-γ重组大肠杆菌的鉴定结果
    3.3 pIL-18、pIFN-γ在大肠杆菌中的诱导表达结果
    3.4 间接ELISA检测血清抗体效价结果
    3.5 重组乳酸乳球菌表达系统的构建
        3.5.1 重组乳酸乳球菌的鉴定结果
    3.6 pIL-18和pIFN-γ在重组乳酸乳球菌的表达及鉴定结果
        3.6.1 SDS-PAGE结果
        3.6.2 Western-blot鉴定结果
    3.7 生物活性检测结果
        3.7.1 MTT法检测抗病毒活性结果
        3.7.2 血清中特异性抗体IgG的检测
        3.7.3 脾淋巴细胞增殖试验结果
        3.7.4 细胞中和试验结果
        3.7.5 攻毒保护试验结果
4 讨论
    4.1 乳酸乳球菌分泌表达系统作为递呈载体的优势
    4.2 猪白介素-18和猪γ-干扰素抗病毒活性的分析
    4.3 猪白介素18和猪γ干扰素对疫苗的免疫增强效应分析
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]乳酸菌对肠粘膜免疫调节的影响[J]. 赵洪梅,杨金生,杨文涛,杨桂连,王春凤.  吉林农业. 2011(05)
[2]乳酸菌作为基因表达载体的研究概况[J]. 白兰芳,戴贤君.  食品研究与开发. 2011(03)
[3]核酸疫苗佐剂的研究进展[J]. 余坚,赵飞骏,吴移谋.  微生物学免疫学进展. 2010(03)
[4]细胞因子在疫苗中的免疫增强作用[J]. 罗满林,唐明森,鲁俊鹏.  中国兽药杂志. 2010(04)
[5]重组人干扰素γ联合弓形虫STAg鼻内免疫小鼠的免疫保护作用[J]. 孟晓丽,弓鸿飞,殷国荣,刘红丽,王海龙,刘美娜.  中国生物制品学杂志. 2009(05)
[6]干扰素在治疗畜禽病毒性疫病上的应用[J]. 郑仲金,李毅,李凤荣,高桂明,吴鹏.  当代畜牧. 2007(07)
[7]γ干扰素及其在动物疾病防控中的应用[J]. 夏伦斌,王新华,连宏军,薄新文,钟发刚.  动物医学进展. 2007(05)
[8]Mx蛋白研究进展[J]. 闫若潜,吴文学,夏春,李新生.  动物医学进展. 2004(06)
[9]重组鸡 γ干扰素的抗球虫作用[J]. 叶秀华,蔡建平,吴志光,汪明.  中国兽医杂志. 2004(07)
[10]肠道屏障功能[J]. 吴国豪.  肠外与肠内营养. 2004(01)

博士论文
[1]奶牛γ-干扰素基因的表达及其在乳房炎防治中的初步应用[D]. 许金俊.扬州大学 2004

硕士论文
[1]牛γ干扰素单克隆抗体的制备与抗原捕获ELISA检测方法的建立[D]. 张月美.中国农业科学院 2009



本文编号：3623421