抗氧化益生乳酸菌筛选及其对IPEC-J2细胞氧化损伤的保护作用
发布时间：2022-02-15 15:15
断奶仔猪腹泻是影响养猪业发展的重要疾病,现如今已经成为全球范围内养猪产业的重要难题之一。由于其发病率高而且危害严重,给养猪业带来了严重的经济损失。产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）则是造成断奶仔猪腹泻的重要病原体,流行病学调查显示,F4+ETEC占据优势地位。研究表明,断奶仔猪腹泻发生时,仔猪肠道出现明显的氧化应激,已有报道显示乳酸菌可以缓解氧化应激,但作用机制尚未完全明确。从抗氧化损伤的角度探讨提高防控断奶仔猪腹泻的效果有望成为一个新的途径。所以本试验在筛选抗氧化益生菌株的基础上,应用细胞氧化应激模型、产肠毒素大肠杆菌感染细胞模型,从细胞和分子水平探究Nrf2信号通路在具有强抗氧化能力的益生乳酸菌抗细胞氧化应激、抵抗产肠毒素大肠杆菌损伤中的作用。所得出的主要结果如下:首先,通过初步分菌,经过革兰氏染色、形态观察和触酶试验的初步筛选,从中国东北传统手工奶酪中共得到322株符合标准的菌株。再次筛选通过模拟体外胃肠道环境,进行耐受强酸、胆盐和胰蛋白酶的测定,筛选出符合标准的菌株。符合标准的23株菌株对常见的...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同乳酸菌各组分体外抗氧化能力的测定结果
东北农业大学农学硕士学位论文表 3-9 不同浓度的 27197 在不同时间与 IPEC-J2 培养的细胞存活率3-9 Cell viability of IPEC-J2 after different time incubation with different concentration27197时间 control 1MOI 2MOI 3MOI1.5 h 100±0.00 99.87±3.23 98.98±1.87 92.34±2.17*3 h 100±0.00 99.23±1.89 91.56±2.89* 80.59±1.09**6 h 100±0.00 98.71±2.01 84.32±2.01** 69.12±1.23**12 h 100±0.00 96.54±1.79 70.79±3.02** 59.89±1.78**24 h 100±0.00 98.72±2.01 60.23±1.23** 39.45±2.11**0.05，**p<0.01 与 control 相比较
图 3-3 不同感染倍数的 27197 与 IPEC-J2 细胞孵化 3 h 后的形态学变化 3-3 Morphological changes of IPEC-J2 after 3 h incubation with different MOI 不同浓度 H2O2对 IPEC-J2 细胞存活率的影响K-8 结果显示：在 H2O2与细胞互作模型中，400 μmol/L、800 μmol/L、1200ol/L、2000 μmol/L 和 2500 μmol/L 时任何时间段对 IPEC-J2 均无明显的增殖活性正常，与对照组比较并无统计学意义（p>0.05）。而 1200 μmol/L、16具有明显的细胞毒作用，在反应 6 h 时能够抑制细胞增长，降低细胞活性。0 μmol/L H2O2对细胞有明显的损伤作用，并且存活率显著性降低，与对照异。结果表明：随着 H2O2浓度增加，作用时间增长，细胞存活率越低；最定 H2O2与 IPEC-J2 氧化应激互作模型的最佳条件为 2000 μmol/L，3 h（如
【参考文献】：
期刊论文
[1]红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用[J]. 高蒙蒙,孙桂波,斯建勇,秦蒙,罗云,孟祥宝,王敏,孙晓波. 中国药理学通报. 2013(02)
[2]栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用[J]. 丁嵩涛,刘洪涛,李文明,李秀英,于超. 中国药理学通报. 2009(06)
[3]过氧化氢酶对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜内细胞因子表达和NF-κB激活的影响[J]. 王群英,王继德,钟慧闽,史芸,张振书,张亚历. 解放军医学杂志. 2006(02)
[4]线粒体细胞色素C释放在H2O2诱导内皮细胞凋亡中的作用[J]. 袁建成,程君涛,秦孝健,肖光夏. 中华烧伤杂志. 2001(06)
博士论文
[1]植物乳杆菌调节猪肠上皮细胞屏障功能和转运载体的研究[D]. 吴云鹏.华南农业大学 2016
[2]产肠毒素大肠杆菌、肠上皮细胞和乳酸菌相互关系的研究[D]. 朱晶.上海交通大学 2011
[3]1，25-二羟基维生素D3对实验性结肠炎肠黏膜屏障的保护作用与机制研究[D]. 赵红伟.河北医科大学 2011
硕士论文
[1]动物肠道源抗铅益生乳酸菌的分离、鉴定及其缓解铅毒性的机理研究[D]. 夏爽.东北农业大学 2016
[2]N-乙酰基-D-半乳糖胺缓解大豆凝集素对猪小肠上皮屏障损伤的研究[D]. 郭楠.吉林农业大学 2015
[3]乳酸杆菌对LPS致敏小肠上皮细胞的免疫调节效应及机制研究[D]. 高侃.浙江农林大学 2015
[4]益生菌对脂多糖刺激仔猪组织中氧化相关指标和有关基因表达的影响[D]. 赵迪.武汉轻工大学 2014
[5]参附注射液对H2O2氧化应激诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用[D]. 郭发先.南昌大学 2014
[6]益生菌对传染性法氏囊病疫苗免疫雏鸡氧化—抗氧化平衡的影响[D]. 景龙.东北农业大学 2012
[7]Nrf2与肝细胞凋亡在非酒精性脂肪性肝病小鼠中的作用及相互关系[D]. 孙健.山东大学 2011
[8]ETEC肠毒素SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 王芳.西北农林科技大学 2011
本文编号：3626855
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同乳酸菌各组分体外抗氧化能力的测定结果
东北农业大学农学硕士学位论文表 3-9 不同浓度的 27197 在不同时间与 IPEC-J2 培养的细胞存活率3-9 Cell viability of IPEC-J2 after different time incubation with different concentration27197时间 control 1MOI 2MOI 3MOI1.5 h 100±0.00 99.87±3.23 98.98±1.87 92.34±2.17*3 h 100±0.00 99.23±1.89 91.56±2.89* 80.59±1.09**6 h 100±0.00 98.71±2.01 84.32±2.01** 69.12±1.23**12 h 100±0.00 96.54±1.79 70.79±3.02** 59.89±1.78**24 h 100±0.00 98.72±2.01 60.23±1.23** 39.45±2.11**0.05，**p<0.01 与 control 相比较
图 3-3 不同感染倍数的 27197 与 IPEC-J2 细胞孵化 3 h 后的形态学变化 3-3 Morphological changes of IPEC-J2 after 3 h incubation with different MOI 不同浓度 H2O2对 IPEC-J2 细胞存活率的影响K-8 结果显示：在 H2O2与细胞互作模型中，400 μmol/L、800 μmol/L、1200ol/L、2000 μmol/L 和 2500 μmol/L 时任何时间段对 IPEC-J2 均无明显的增殖活性正常，与对照组比较并无统计学意义（p>0.05）。而 1200 μmol/L、16具有明显的细胞毒作用，在反应 6 h 时能够抑制细胞增长，降低细胞活性。0 μmol/L H2O2对细胞有明显的损伤作用，并且存活率显著性降低，与对照异。结果表明：随着 H2O2浓度增加，作用时间增长，细胞存活率越低；最定 H2O2与 IPEC-J2 氧化应激互作模型的最佳条件为 2000 μmol/L，3 h（如
【参考文献】：
期刊论文
[1]红车轴草总黄酮对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用[J]. 高蒙蒙,孙桂波,斯建勇,秦蒙,罗云,孟祥宝,王敏,孙晓波. 中国药理学通报. 2013(02)
[2]栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用[J]. 丁嵩涛,刘洪涛,李文明,李秀英,于超. 中国药理学通报. 2009(06)
[3]过氧化氢酶对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜内细胞因子表达和NF-κB激活的影响[J]. 王群英,王继德,钟慧闽,史芸,张振书,张亚历. 解放军医学杂志. 2006(02)
[4]线粒体细胞色素C释放在H2O2诱导内皮细胞凋亡中的作用[J]. 袁建成,程君涛,秦孝健,肖光夏. 中华烧伤杂志. 2001(06)
博士论文
[1]植物乳杆菌调节猪肠上皮细胞屏障功能和转运载体的研究[D]. 吴云鹏.华南农业大学 2016
[2]产肠毒素大肠杆菌、肠上皮细胞和乳酸菌相互关系的研究[D]. 朱晶.上海交通大学 2011
[3]1，25-二羟基维生素D3对实验性结肠炎肠黏膜屏障的保护作用与机制研究[D]. 赵红伟.河北医科大学 2011
硕士论文
[1]动物肠道源抗铅益生乳酸菌的分离、鉴定及其缓解铅毒性的机理研究[D]. 夏爽.东北农业大学 2016
[2]N-乙酰基-D-半乳糖胺缓解大豆凝集素对猪小肠上皮屏障损伤的研究[D]. 郭楠.吉林农业大学 2015
[3]乳酸杆菌对LPS致敏小肠上皮细胞的免疫调节效应及机制研究[D]. 高侃.浙江农林大学 2015
[4]益生菌对脂多糖刺激仔猪组织中氧化相关指标和有关基因表达的影响[D]. 赵迪.武汉轻工大学 2014
[5]参附注射液对H2O2氧化应激诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用[D]. 郭发先.南昌大学 2014
[6]益生菌对传染性法氏囊病疫苗免疫雏鸡氧化—抗氧化平衡的影响[D]. 景龙.东北农业大学 2012
[7]Nrf2与肝细胞凋亡在非酒精性脂肪性肝病小鼠中的作用及相互关系[D]. 孙健.山东大学 2011
[8]ETEC肠毒素SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[D]. 王芳.西北农林科技大学 2011
本文编号：3626855
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