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整合素β1影响狂犬病病毒的外周入侵

发布时间:2022-02-15 19:57
  狂犬病是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种重要人兽共患病,每年导致约59,000人死于该病,严重威胁着人类社会公共卫生安全。人间狂犬病基本经犬类咬、抓伤所传播,一旦发病致死率几乎为100%。目前仍无有效治疗狂犬病的药物。深入研究RABV入侵宿主细胞的机制,不仅有利于深入阐明RABV致病机制,还将有助于设计新型的狂犬病疫苗和筛选有效的狂犬病治疗药物靶点。目前已经发现多个影响RABV入侵的宿主因子,但仍然存在其它的关键宿主因子影响RABV的入侵。因此,继续挖掘影响RABV入侵的关键宿主因子具有重要意义。本研究团队前期开展了影响RABV生命周期相关宿主因子的RNA干扰(RNA interference,RNAi)筛选工作,发现了整合素 β1(integrin β1,ITGB1)在 RABV 感染人胚胎肾细胞(Human Embryonic Kidney 293 cell,HEK-293)中起重要作用。本研究通过siRNA(short interfering RNA)干扰技术分别下调表达HEK293 细胞和小鼠神经母瘤细胞(mouse Neuroblastoma ce... 

【文章来源】:中国农业科学院北京市

【文章页数】:68 页

【学位级别】:博士

【部分图文】:

整合素β1影响狂犬病病毒的外周入侵


图3.1?siRNA敲低和质粒过表达丨TGB丨影响RABV对细胞的感染

细胞,可溶性,蛋白,感染率


?bHBB?t?25?tst??HW1^?iBigaS?W^S^k?IRP?Uig/mLl?lTGBlE0(Mg/mL)??B??IRP?(pg/mL)??ITGB1cd?(pg/mL)???pg/mL?100?25?50?1?00?1?5°"?'15°?^??Hoechst?|?100-?r^|?^?J-?j?-100?I??—圃?_鑫_?5。i??Merge?■顔1°?W?2.5?5b?T。??IRP(MgymL)?ITGB1t0?(Mg/mL)??图3.4ITGB1可溶性蛋白(ITGB1ED)中和RABV对细胞的感染。ITGB1ED?(A)在??HEK293细胞(A)和N2a细胞(B)?hlTGBlm能够中和ERA-eGFP的感染能力,jf-??具有剂量依赖性。高浓度的GST标签的非相关性蛋「I?(IRP)作为对照。细胞用以检测??细胞活力、染色获得感染图像并分析K感染率。细胞活忡和感染率显示为与对照组丨狀??处理组相比的扣对量,对照组定义为100%。数据差异性统计应T检验显示。*,^<0.05;??***,尸<0.001。??Figure?3.1.?Soluble?JTCB1?(ITGBUd)?neutralizes?infectivity?of?RABV?in?cells.?ITGB1ED??neutralized?ERA-eGFP?infection?in?HEK293?(A)?and?N2a?(B)?cells?in?a?dose-dependent??manner.?GST-tagged?irrelative?protein?(TRP)?at?high?concentration?

抗体,细胞


?----??A-4?—??l〇G7i?—????k〇ji?I?I??170?I?一一?■?I?f?15〇l?^?,,?.??一?■?'_M?I-?I?1??^?'To?^?■晒ERAG?|?100-?——??S5?i?丄????UJ??170?—??>tGBi?!?M-?■?—??a?loo??5?丄??6?too?纏?1??麵ERAG?k?J?^pi?II?1??55?mm??WT?l〇Q?J?A-4??图3.5丨TGBl抗体阻断RABV对细胞的感染。(A)ITGBl鼠单克隆抗体A-4在HEK293??细胞(I)和N2a细胞(II)上能够阻断ERA-eGFP的感染能力,并具有剂量依赖性。??高浓度的鼠IgG2a作为对照。细胞用以检测细胞活力、染色获得感染图像并分析其感染??率。细胞活性和感染率显示为与对照组IgG2a处理组相比的相对量,对照组定义为100%。??(B)co-IP实验证明A-4削弱了?ITGB1与RABVG之间的相互作用。无抗体处理(NT)??和IgG2a处理的ITGBl-Flag实验组作为对照。ITGB1与RABV?G的相互作用水平通过??Image?J软件分析co-IP实验前后ERAG-Myc灰度值比值(ERAG-Myc:?IP/Input)表示,??31??

【参考文献】:
期刊论文
[1]烟碱型乙酰胆碱受体及其亚单位的结构功能[J]. 王秋雨,金莉莉,LI Ziwei.  细胞生物学杂志. 2004(03)



本文编号:3627173

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