耐伊维菌素捻转血矛线虫耐药性相关蛋白的分离与鉴定
发布时间：2022-02-16 11:39
寄生性线虫在全球范围内广泛流行,尤其是其中的捻转血矛线虫,为严重危害反刍动物的寄生性线虫之一。尽管使用驱虫药能较好地控制此类线虫,但虫体的耐药性问题却越来越不容忽视。对于虫体的耐药性问题,限于研究方法,目前仍十分缺乏系统的耐药性现状和耐药机理方面的资料。鉴于此,本研究拟以耐伊维菌素捻转血矛线虫作研究对象,在获得虫体和虫卵蛋白的基础上,对其中所含蛋白质进行Shot-gun LC MS/MS分析,以发现与耐药性相关的蛋白,具体结果如下:（1）捻转血矛线虫虫卵裂解方法的筛选先以糖盐水漂浮法获取捻转血矛线虫虫卵,再分别以酶解法、反复冻融法、强酸强碱液法以及酶解与反复冻融结合法裂解虫卵,然后在镜下观察虫卵结构和计数未裂解虫卵数,并以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证裂解效果。最终确定当1mL虫卵悬液中加入2mL几丁质酶溶液作用45min,再将虫卵悬液放入液氮中冻存30min,然后取出于50℃水浴6h,反复3次,虫卵裂解效果最好,裂解率为93%。（2）捻转血矛线虫虫体裂解方法的筛选对捻转血矛线虫三期幼虫,分别以液氮研磨法、反复冻融法、脱鞘后液氮研磨法以及脱鞘后反复冻融法裂解幼虫虫体,结果显示脱鞘后液氮...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
1.1 家畜线虫病概述
1.2 捻转血矛线虫概述
1.2.1 捻转血矛线虫简介
1.2.2 捻转血矛线虫的形态
1.2.3 捻转血矛线虫的生活史
1.2.4 捻转血矛线虫流行病学概况
1.2.5 捻转血矛线虫的防控现状
1.3 捻转血矛线虫的检测相关研究
1.4 捻转血矛线虫耐药性相关研究
1.5 几丁质酶
1.6 研究的目的与意义
2 研究一 捻转血矛线虫虫卵裂解方法研究
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 虫卵裂解法优化结果
2.2.2 捻转血矛线虫虫卵蛋白SDS-PAGE凝胶电泳结果
2.3 讨论与小结
2.3.1 讨论
2.3.2 小结
3 研究二 捻转血矛线虫三期幼虫裂解方法的研究
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 捻转血矛线虫三期幼虫裂解方法筛选结果
3.2.2 捻转血矛线虫三期幼虫虫体蛋白的SDS-PAGE电泳结果
3.3 讨论与小结
3.3.1 讨论
3.3.2 小结
4 研究三 捻转血矛线虫蛋白质的Shotgun LC MS/MS分析
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.1.3 质谱数据分析
4.2 结果
4.2.1 质谱数据
4.2.2 蛋白质鉴定结果
4.2.3 共同蛋白鉴定结果
4.2.4 差异蛋白鉴定结果
4.2.5 GO功能注释结果
4.3 讨论与小结
4.3.1 讨论
4.3.2 小结
5 研究四捻转血矛线虫虫体蛋白的Western-blot分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果
5.2.1 捻转血矛线虫虫体蛋白质的Western-blot结果
5.3 讨论与小结
5.3.1 讨论
5.3.2 小结
结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]兽药残留的危害及其应对措施[J]. 郝娟娟. 当代畜禽养殖业. 2018(10)
[2]国内羊胃肠道寄生虫流行病学调查及捻转血矛线虫系统进化分析[J]. 郭筱璐,杨怡,施宇,黄艳,时恒枝,张玲,周静茹,陈学秋,杜爱芳. 中国兽医学报. 2018(07)
[3]羊捻转血矛线虫病的危害及其防控[J]. 夏道伦,李淑萍. 兽医导刊. 2018(13)
[4]羊捻转血矛线虫病的诊断与治疗[J]. 杜伟娜. 中国畜牧兽医文摘. 2017(10)
[5]动物性药物残留对人体的危害及控制措施[J]. 杨兵. 农村经济与科技. 2017(14)
[6]Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子优化培养及其杀线虫幼虫剂量研究[J]. 陈林军,刘省段,杨晓野,王瑞,李莹莹,李军燕,罗晓平. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2017(09)
[7]伊维菌素防治动物寄生虫病的研究进展[J]. 杨森,熊尚清,杨敬,陈红伟,曾杨梅,吴俊伟. 黑龙江畜牧兽医. 2017(09)
[8]几丁质酶的研究进展[J]. 姜竹峪,陈羽,魏锦兴,陈珊,徐威. 沈阳药科大学学报. 2016(05)
[9]浏阳黑山羊捻转血矛线虫感染情况调查及pcox1基因分析[J]. 周才瑛,王先坤,刘毅,刘伟. 动物医学进展. 2015(09)
[10]不同培养条件对捕食性真菌Duddingtonia flagrans生长的影响[J]. 李军燕,杨晓野,王瑞,杨莲茹,邓侨,罗晓平. 中国兽医学报. 2015(06)
博士论文
[1]广州管圆线虫感染免疫中ICOS-ICOSL通路及发育期蛋白的分析和研究[D]. 黄慧聪.苏州大学 2013
[2]捻转血矛线虫滞育相关基因daf-22和hsp70全基因的获得及其功能的研究[D]. 张红丽.浙江大学 2012
[3]捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶DNA疫苗的免疫保护作用与烯醇化酶特性的研究[D]. 韩凯凯.南京农业大学 2011
[4]捻转血矛线虫H11抗原cDNA基因克隆、表达及山羊免疫保护性试验[D]. 严若峰.南京农业大学 2004
硕士论文
[1]耐伊维菌素捻转血矛线虫相关分泌性蛋白的研究[D]. 尹相吉.内蒙古农业大学 2019
[2]蛋白酶体β5亚基调节捻转血矛线虫生长发育的功能研究[D]. 张洪润.华中农业大学 2018
[3]日本血吸虫热休克蛋白超家族及其在尾蚴入侵阶段应激反应的初步分析研究[D]. 谢郁.南方医科大学 2016
[4]捻转血矛线虫热休克蛋白70和过氧化氢酶生物学特性研究[D]. 卜永谦.南京农业大学 2016
[5]捻转血矛线虫肌动蛋白DNA疫苗的免疫保护性实验与醛缩酶特性的研究[D]. 王晶晶.南京农业大学 2010
[6]家蚕蚕蛹过敏原蛋白质组学和分子生物学研究[D]. 刘硕.南昌大学 2010
[7]捻转血矛线虫体外培养条件优化和H11蛋白提取及氨肽酶活性分析[D]. 赵媛媛.东北农业大学 2010
[8]博州地区羊消化道寄生虫感染调查及冬季驱虫试验研究[D]. 解晓钰.新疆农业大学 2009
本文编号：3627897
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
1 引言
1.1 家畜线虫病概述
1.2 捻转血矛线虫概述
1.2.1 捻转血矛线虫简介
1.2.2 捻转血矛线虫的形态
1.2.3 捻转血矛线虫的生活史
1.2.4 捻转血矛线虫流行病学概况
1.2.5 捻转血矛线虫的防控现状
1.3 捻转血矛线虫的检测相关研究
1.4 捻转血矛线虫耐药性相关研究
1.5 几丁质酶
1.6 研究的目的与意义
2 研究一 捻转血矛线虫虫卵裂解方法研究
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果
2.2.1 虫卵裂解法优化结果
2.2.2 捻转血矛线虫虫卵蛋白SDS-PAGE凝胶电泳结果
2.3 讨论与小结
2.3.1 讨论
2.3.2 小结
3 研究二 捻转血矛线虫三期幼虫裂解方法的研究
3.1 材料和方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 捻转血矛线虫三期幼虫裂解方法筛选结果
3.2.2 捻转血矛线虫三期幼虫虫体蛋白的SDS-PAGE电泳结果
3.3 讨论与小结
3.3.1 讨论
3.3.2 小结
4 研究三 捻转血矛线虫蛋白质的Shotgun LC MS/MS分析
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.1.3 质谱数据分析
4.2 结果
4.2.1 质谱数据
4.2.2 蛋白质鉴定结果
4.2.3 共同蛋白鉴定结果
4.2.4 差异蛋白鉴定结果
4.2.5 GO功能注释结果
4.3 讨论与小结
4.3.1 讨论
4.3.2 小结
5 研究四捻转血矛线虫虫体蛋白的Western-blot分析
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果
5.2.1 捻转血矛线虫虫体蛋白质的Western-blot结果
5.3 讨论与小结
5.3.1 讨论
5.3.2 小结
结论
致谢
参考文献
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]兽药残留的危害及其应对措施[J]. 郝娟娟. 当代畜禽养殖业. 2018(10)
[2]国内羊胃肠道寄生虫流行病学调查及捻转血矛线虫系统进化分析[J]. 郭筱璐,杨怡,施宇,黄艳,时恒枝,张玲,周静茹,陈学秋,杜爱芳. 中国兽医学报. 2018(07)
[3]羊捻转血矛线虫病的危害及其防控[J]. 夏道伦,李淑萍. 兽医导刊. 2018(13)
[4]羊捻转血矛线虫病的诊断与治疗[J]. 杜伟娜. 中国畜牧兽医文摘. 2017(10)
[5]动物性药物残留对人体的危害及控制措施[J]. 杨兵. 农村经济与科技. 2017(14)
[6]Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子优化培养及其杀线虫幼虫剂量研究[J]. 陈林军,刘省段,杨晓野,王瑞,李莹莹,李军燕,罗晓平. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2017(09)
[7]伊维菌素防治动物寄生虫病的研究进展[J]. 杨森,熊尚清,杨敬,陈红伟,曾杨梅,吴俊伟. 黑龙江畜牧兽医. 2017(09)
[8]几丁质酶的研究进展[J]. 姜竹峪,陈羽,魏锦兴,陈珊,徐威. 沈阳药科大学学报. 2016(05)
[9]浏阳黑山羊捻转血矛线虫感染情况调查及pcox1基因分析[J]. 周才瑛,王先坤,刘毅,刘伟. 动物医学进展. 2015(09)
[10]不同培养条件对捕食性真菌Duddingtonia flagrans生长的影响[J]. 李军燕,杨晓野,王瑞,杨莲茹,邓侨,罗晓平. 中国兽医学报. 2015(06)
博士论文
[1]广州管圆线虫感染免疫中ICOS-ICOSL通路及发育期蛋白的分析和研究[D]. 黄慧聪.苏州大学 2013
[2]捻转血矛线虫滞育相关基因daf-22和hsp70全基因的获得及其功能的研究[D]. 张红丽.浙江大学 2012
[3]捻转血矛线虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶DNA疫苗的免疫保护作用与烯醇化酶特性的研究[D]. 韩凯凯.南京农业大学 2011
[4]捻转血矛线虫H11抗原cDNA基因克隆、表达及山羊免疫保护性试验[D]. 严若峰.南京农业大学 2004
硕士论文
[1]耐伊维菌素捻转血矛线虫相关分泌性蛋白的研究[D]. 尹相吉.内蒙古农业大学 2019
[2]蛋白酶体β5亚基调节捻转血矛线虫生长发育的功能研究[D]. 张洪润.华中农业大学 2018
[3]日本血吸虫热休克蛋白超家族及其在尾蚴入侵阶段应激反应的初步分析研究[D]. 谢郁.南方医科大学 2016
[4]捻转血矛线虫热休克蛋白70和过氧化氢酶生物学特性研究[D]. 卜永谦.南京农业大学 2016
[5]捻转血矛线虫肌动蛋白DNA疫苗的免疫保护性实验与醛缩酶特性的研究[D]. 王晶晶.南京农业大学 2010
[6]家蚕蚕蛹过敏原蛋白质组学和分子生物学研究[D]. 刘硕.南昌大学 2010
[7]捻转血矛线虫体外培养条件优化和H11蛋白提取及氨肽酶活性分析[D]. 赵媛媛.东北农业大学 2010
[8]博州地区羊消化道寄生虫感染调查及冬季驱虫试验研究[D]. 解晓钰.新疆农业大学 2009
本文编号：3627897
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3627897.html
